玉米BK2L3基因過表達載體的構建及在番茄中的遺傳轉化.pdf

1、細胞壁是植物細胞結構的重要組成成份，具有穩(wěn)定細胞形態(tài)、減少機械損傷等功能。纖維素作為植物細胞壁的主要成分，在細胞壁生物合成途徑中發(fā)揮重要作用。COBRA基因家族因參與細胞壁合成，探究其家族成員對果實發(fā)育及成熟的作用富有意義。有研究指出，番茄SlCOBRA-Like基因在果實發(fā)育早期高度表達且表達量隨成熟度增加而降低。同時，該基因轉入番茄中會產生同源共抑制現(xiàn)象。因此對玉米BK2L3基因進行初步研究，以期以基因工程手段延長番茄果實貨架期，同

2、時消除同源共抑制現(xiàn)象。
　　玉米BK2L3基因是COBRA基因家族的成員之一。本研究利用RT-PCR技術從玉米cDNA中擴增出玉米BK2L3基因全長，導入啟動子為果實特異表達的TFM7植物表達載體pBI121上，構建玉米BK2L3基因果實特異表達的過量表達載體后，通過農桿菌介導的方式轉入野生型番茄中，經陽性鑒定，獲得BK2L3轉基因植株。
　　本研究分別以野生型番茄和玉米BK2L3轉基因植株果實為研究對象，進行初步分析。通過

3、分析玉米BK2L3在果實中的表達情況，觀察綠熟期果實果皮細胞壁結構，測定紅熟期果實的硬度、貨架期和果皮纖維素含量，探究玉米BK2L3基因的功能。半定量RT-PCR分析結果表明:玉米BK2L3基因在轉基因番茄植株中有較高表達，在野生型番茄植株中沒有表達。轉基因番茄果實的硬度、果皮纖維素含量明顯高于野生型番茄。顯微觀察石蠟切片顯示:轉基因番茄果皮厚度與野生型相比，明顯增厚，細胞大小均勻。而且，轉基因番茄果實在貯藏期間失水率降低，有效延長果實