OsCH2和OsHSP82基因過表達載體構建和水稻遺傳轉化.pdf

1、我國的主要農作物水稻每年因高溫熱害而造成巨大的減產。水稻耐熱相關基因的功能鑒定和調控研究對闡明耐熱機制，通過基因工程手段改進水稻作物的耐熱性具有十分重要的意義。 葉黃素可破壞高溫產生的“活性氧”提高植物的耐熱性，高溫熱激下產生的熱激蛋白也可提高植物的耐熱力。因此通過構建水稻β-胡蘿卜素羥化酶基因OsCH2和熱激蛋白基因OsHSP82過表達載體，進而對轉基因水稻耐熱性進行鑒定，可望確定其功能及獲得水稻耐熱新材料。 以擬南芥

2、β-胡蘿卜羥化酶和熱激蛋白基因的序列，從Tigr Rice Genome Annotation檢索到與抗旱耐熱功能相關的水稻B一胡蘿卜素羥化酶基因3個和熱激蛋白基因53個，從中各選取一個基因作該研究用。這兩個基因的Locus Name分別為LOC Os04g48880和LOC_Os09g30418。從全長cDNA數(shù)據(jù)庫獲得了對應的全長cDNA，登錄號分別為AK060559和AK061896，各命名為OsCH2和OsHSP820水稻OsC

3、H2蛋白與玉米、龍膽草、阿拉比卡咖啡豆、番茄、甜橙、番紅花蛋白同源性分別為85％、57％、57％、60％、58％和61％，OsHSP82蛋白與小麥、大麥、煙草、番茄和擬南芥蛋白同源性分別為95％、94％、90％、90％和89％。水稻OsCH2蛋白存在2個跨膜螺旋結構域，在C端存在一個β-胡蘿卜素羥化酶功能域，還存在一個與脂質體代謝有關的固醇去飽和酶保守區(qū)。水稻OsHSP82蛋白無跨膜結構域，在N末端存在一個組氨酸蛋白激酶功能域，還存在一

4、個HSP90結構域。 從Rice Genome Resource Center索取到含全長cDNA的質粒AK060559和AK061896，并根據(jù)水稻OsCH2和水稻OsHSP82全長cDNA基因序列設計引物，擴增水稻OsCH2和水稻OsHSP82全長cDNA片段并將其克隆到植物表達載體pCAMB工A-1300-multi中，置于CaMv35S啟動子下游，使其目的基因能夠過分表達。對重組子進行PCR和酶切鑒定，獲得正確的水稻β-