同種異體軟骨細(xì)胞-Ⅰ-Ⅲ膠原膜修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的研究.pdf

1、研究目的：
　　 ①體外構(gòu)建負(fù)載有兔軟骨細(xì)胞的。Ⅰ/Ⅲ型膠原膜復(fù)合物，并觀察兔軟骨細(xì)胞在支架內(nèi)三維立體培養(yǎng)的分布、生長(zhǎng)情況。
　　 ②對(duì)比觀察單純Ⅰ/Ⅲ型膠原膜、體外培養(yǎng)好的同種異體軟骨細(xì)胞—Ⅰ/Ⅲ型膠原膜支架復(fù)合物分別修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型的效果。
　　 研究方法：
　　 ①新西蘭白兔軟骨細(xì)胞分離、培養(yǎng)：2周齡新西蘭白兔1只，耳緣靜脈空氣栓塞處死動(dòng)物，無(wú)菌條件下剖取雙側(cè)膝關(guān)節(jié)，銳刀刮取膝關(guān)節(jié)股骨和脛骨

2、平臺(tái)全層軟骨，酶消法分離軟骨細(xì)胞后，根據(jù)計(jì)數(shù)以1×105/ml分裝在25ml培養(yǎng)瓶中，每瓶5ml，傳至2代即可。每天在倒置顯微鏡下細(xì)胞的生長(zhǎng)情況；細(xì)胞爬片3日后HE染色、蕃紅O染色、Ⅱ-型膠原免疫組化。
　　 ②兔軟骨細(xì)胞-Ⅰ/Ⅲ型膠原復(fù)合物體外構(gòu)建與培養(yǎng)：選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第2代細(xì)胞消化離心，用含20％胎牛血清的DMEM液配制成濃度為6×106/ml的細(xì)胞懸液，滴入Ⅰ/Ⅲ型膠原膜中。培養(yǎng)3天后進(jìn)行有關(guān)檢測(cè)：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞

3、形態(tài)和生長(zhǎng)情況；HE染色、蕃紅O染色、Ⅱ-型膠原免疫組化。
　　 ③體內(nèi)試驗(yàn)：4月齡兔子麻醉后在雙側(cè)膝關(guān)節(jié)股骨滑車(chē)造直徑3.8mm深2mm的全層軟骨缺損，隨機(jī)分成兩組：對(duì)照組植入Ⅰ/Ⅲ型膠原，移植組植入同種異體軟骨細(xì)胞-Ⅰ/Ⅲ型膠原復(fù)合體。術(shù)后8周、12周各處死動(dòng)物6只觀察膝關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)效果：大體標(biāo)本觀察；組織學(xué)HE染色、蕃紅O染色及Ⅱ-型膠原免疫組化；采用半定量評(píng)分表評(píng)價(jià)修復(fù)效果。
　　 結(jié)果：
　　 軟骨

4、細(xì)胞能夠貼附在Ⅰ/Ⅲ膠原膜表面，并表現(xiàn)出典型的球狀立體結(jié)構(gòu)，同種異體軟骨細(xì)胞移植組6周時(shí)即可表現(xiàn)出類(lèi)透明樣軟骨，Ⅱ-型膠原免疫組化染色呈陽(yáng)性，12周時(shí)的修復(fù)組織為類(lèi)透明軟骨組織，軟骨和軟骨下骨重塑，新生組織的Ⅱ-型膠原免疫組化染色呈強(qiáng)陽(yáng)性。對(duì)照組6周和12周時(shí)缺損處均為纖維組織修復(fù)，Ⅱ-型膠原免疫組化染色呈陰性。移植組的半定量組織學(xué)評(píng)分顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 研究表明同種異體兔軟骨細(xì)胞復(fù)合Ⅰ