同種異體組織工程軟骨修復豬膝關節(jié)軟骨缺損可行性的研究.pdf

1、目的：
　　探討胚胎來源的骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）體外構建的組織工程軟骨移植修復同種異體大動物關節(jié)軟骨缺損的可行性。
　　方法：
　　1．通過剖腹產(chǎn)術獲得胎齡為70天的胎豬，經(jīng)沖洗法獲得胎豬骨髓液經(jīng)經(jīng)貼壁培養(yǎng)法獲得胎豬BMSCs，抽取成年豬（大于1歲）骨髓液經(jīng)貼壁培養(yǎng)法獲得成年豬BMSCs，體外擴增培養(yǎng)并觀察細胞形態(tài)，描記生長曲線，對比兩種細胞

2、的擴增能力。對BMSCs進行成骨、成脂、成軟骨三向誘導。通過對比胎豬BMSCs和成年豬BMSCs的體外擴增能力和多向分化潛能，對比兩種細胞的干細胞特性。
　　2．分別將擴增后的胎豬BMSCs和成年豬BMSCs以108/ml的細胞濃度接種于聚乳酸包埋的聚羥基乙酸支架，體外誘導培養(yǎng)8周后取材。通過大體觀察、糖胺聚糖（GAG）含量測定、總膠原含量測定、生物力學測定以及組織化學與免疫組織化學染色等方法對兩種細胞構建的組織工程軟骨相關生物學

3、特性進行比較，對比兩種細胞體外構建組織工程軟骨的能力。
　　3.以上海白豬為動物模型，建立豬膝關節(jié)軟骨缺損模型，用胎豬BMSCs體外構建的軟骨修復缺損區(qū)域。分別于修復術后3個月和6個月取材，通過大體觀察及組織形態(tài)學計量分析、總膠原含量測定等檢測評估修復軟骨缺損情況。
　　結果：
　　1．胎豬骨髓和成年豬骨髓中含有基質(zhì)干細胞。胎豬BMSCs和成年豬BMSCs相比，有更好的增殖能力，能夠滿足構建組織的種子細胞量的需求。經(jīng)過

4、傳代后BMSCs，具有至少向三類組織細胞定向分化的潛能，胎豬BMSCs在成骨和成脂分化能力均優(yōu)于成年豬BMSCs，顯示了胎豬BMSCs更好的干細胞特性。
　　2.胎豬 BMSCs在體外構建出較好的組織工程軟骨，其和成年豬BMSCs構建的軟骨相比中空現(xiàn)象不明顯，組織學，力學和定量結果都顯示胎豬BMSCs構建的軟骨質(zhì)量優(yōu)于成年豬BMSCs構建的軟骨。因此，胎豬BMSCs是軟骨組織工程良好的種子細胞來源。
　　3.從術后取材大體觀

5、我們可以推測胎豬 BMSCs構建的組織工程軟骨有望修復同種異體豬膝關節(jié)軟骨缺損，但是否能成功修復缺損還需要組織學，定量及生物力學等方面的進一步驗證。
　　結論：
　　1.胚胎骨髓中含有基質(zhì)干細胞，其體外擴增能力和多向分化能力均優(yōu)于成年來源骨髓基質(zhì)干細胞。
　　2.胚胎來源BMSCs體外可以構建出質(zhì)量良好的組織工程軟骨。
　　3.胚胎來源 BMSCs構建的組織工程軟骨修復大動物膝關節(jié)軟骨缺損體內(nèi)初步結果顯示有修復的