6-羥多巴胺通過內質網應激誘發(fā)的內源性鈣釋放對多巴胺能神經元功能及存活的影響及機制的研究.pdf

1、背景
　　帕金森病（PD）是目前常見的神經退行性疾病之一，約影響1％的老年人群[1,2]。PD發(fā)病原因及機制尚不明確，PD的病理特征是黑質致密部（SNc）多巴胺能神經元的喪失和路易體（LB）的產生，其中路易體（LB）主要是α-突觸核蛋白（α-Syn）的聚集體構成[3]。
　　由內質網應激引起的鈣離子穩(wěn)態(tài)失衡是多巴胺能神經元選擇性損失的重要分子機制，ER表面的肌醇1,4,5-三磷酸受體（IP3 Rs）和蘭諾定受體（RyRs），

2、是主要的內源性Ca2+釋放通道，在調節(jié)Ca2+穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關鍵作用。但是，這些內源性Ca2+釋放通道在PD中的作用及其對功能的影響和DA神經元的存活仍然未知。
　　已有研究表明在6-OHDA作用下胞質內鈣離子升高會引起多巴胺能神經元質膜鈣離子通道變化等一系列變化，但是對內源性鈣釋放以及其對細胞興奮性影響、細胞氧化應激和細胞存活的研究較少，對內質網上兩個通道各自在內源性鈣釋放中的重要性研究尚缺乏。
　　目的
　　通過研究6

3、-OHDA誘導內質網應激下內質網鈣離子釋放以及對黑質致密部DA神經元興奮性、細胞氧化應激以及細胞存活的影響，探討6-OHDA誘導內質網應激下細胞質鈣離子變化、細胞興奮性改變和細胞存活變化的機制。為SNc區(qū)多巴胺能神經元易損性提供一定的基礎支持。
　　方法
　　1．采用Western-Blot法、鈣成像實驗，檢測6-OHDA對內質網應激和細胞內源性鈣釋放的影響。并通過相應的抑制劑和通道阻斷劑的運用探討其機制。
　　2．采

4、用全細胞膜片鉗的方法探討6-OHDA誘發(fā)的胞質內高鈣對 SNc區(qū)多巴胺能神經元電活性的影響。
　　3．利用ROS染色和線粒體形態(tài)染色，探討6-OHDA誘發(fā)的胞質內高鈣對多巴胺能神經元氧化應激的影響。
　　4．通過MTT和TUNEL染色，探討6-OHDA誘發(fā)的胞質內高鈣對多巴胺能神經元存活的影響。
　　結果
　　1． Western-Blot實驗證實6-OHDA可引起多巴胺能神經元內質網應激；鈣成像實驗證明6-OH

5、DA誘導多巴胺能神經元內質網應激會造成神經元胞質內鈣離子濃度持續(xù)性和不可逆性升高，而且這種升高與內質網應激狀態(tài)和內質網上RYR鈣離子通道密切相關。
　　2．全細胞膜片鉗實驗證實6-OHDA誘導的神經元胞質內鈣離子濃度持續(xù)性和不可逆性升高會持續(xù)的和不可逆的影響多巴胺能神經元興奮性，而且這種影響與內質網應激狀態(tài)和內質網上RyR鈣離子通道密切相關。
　　3．ROS實驗和線粒體染色證實6-OHDA誘導的神經元胞質內鈣離子濃度升高會部

6、分參與神經元氧化應激狀態(tài)的誘發(fā)，而且這種影響與內質網應激狀態(tài)、細胞胞質內高鈣濃度和內質網上RyR鈣離子通道密切相關。
　　4．MTT實驗和TUNEL染色證實6-OHDA誘導的神經元胞質內鈣離子濃度升高會誘發(fā)多巴胺能神經元死亡，而且這種影響與內質網應激狀態(tài)和內質網上RYR鈣離子通道密切相關。
　　結論
　　1．細胞功能的研究中，6-OHDA可以誘發(fā)多巴胺能神經元內質網應激，進而導致內質網內鈣離子外流進入細胞質誘發(fā)胞質內鈣

7、離子濃度升高，而且這種內質網鈣離子外流主要和內質網上RyR鈣離子通道有關。
　　2．多巴胺能神經元興奮性的研究中，6-OHDA可以誘發(fā)的胞質內鈣離子濃度升高，會降低SNc區(qū)多巴胺能神經元的興奮性。
　　3．6-OHDA致多巴胺能神經元氧化應激的研究中，6-OHDA可以誘發(fā)的胞質內鈣離子濃度升高部分的參與了6-OHDA導致的多巴胺能神經元氧化應激。
　　4．6-OHDA可以誘發(fā)的胞質內鈣離子濃度升高參與了6-OHDA的細