降解玉米赤霉烯酮和黃曲霉毒素B1菌株的篩選、鑒定及評價.pdf

1、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)和黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)，是由真菌產(chǎn)生的具有強烈毒的次級代謝產(chǎn)物。飼料及食品中的真菌毒素污染嚴重威脅著人類和動物的健康，因此，探求安全、高效、無毒副作用的清除真菌毒素污染的方法成為研究熱點。本研究旨在從發(fā)霉飼料和草食動物糞便中篩選出高效降解ZEN和AFB的微生物，并探索降解特性、機理以及降解產(chǎn)物的致毒活性。
　　試驗一降解ZEN菌株的篩選、鑒定及評價

2、>　　以ZEN為唯一碳源和能源，初篩分離到40株存活菌株，復篩從種兔糞便中篩選到菌株H6，降解率最高，達85.37％。結合形態(tài)學、生理生化特性和16S rRNA基因測序分析鑒定菌株H6為解淀粉芽孢桿菌（Bacllus amyloliquefaciens）。菌株H6以6％接種量發(fā)酵培養(yǎng)后，其發(fā)酵液在37℃、180r/mn、72h時，對1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL和20μg/mL ZEN降解率分別為95.60％

3、，91.38％，93.64％，88.60％和85.80％，其中在12h和24h時，對1μg/mL降解率分別為8669％和89.34％，對20μg/mL的降解率分別為76.67％和84.14％。對于1μg/mL ZEN，在37℃、180r/min、72h時，菌株H6上清液和菌懸液的清除率為6893％和28.70％，而經(jīng)蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和熱處理后的上清液幾乎無降解活性，80％硫酸銨沉淀的胞外蛋白和聚乙二醇6000濃縮8倍上清的降解

4、率分別為:59.68％和93.80％。ZEN降解產(chǎn)物在MCF-7細胞上的增值率顯著降低。LC-MS分析ZEN降解產(chǎn)物分子量為398。以上結果表明從種兔糞便中篩選到的解淀粉芽孢桿菌H6（Bacillus amyloliquefaciens H6）對于1～20μg/mL ZEN均具有較高的降解活性，發(fā)揮降解作用的主要是菌株分泌的胞外酶，濃縮上清液具有較好的降解效果，ZEN被降解成分子量為398的無雌激素作用的物質(zhì)。
　　試驗二降解AF

5、B1菌株的篩選、鑒定及評價
　　以香豆素為唯一碳源和能源，初篩分離到42株存活菌株，復篩從羊糞便中篩選到菌株S1，降解活性最高，降解率達61.36％。結合形態(tài)學、生理生化特性和16S rRNA基因測序分析鑒定菌株S1為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。菌株S1以10％接種量發(fā)酵培養(yǎng)后，其發(fā)酵液在37℃、180r/min、48h和72h時，對1μg/mL AFB1的降解率分別為46.21％和80.26％。菌株S1上

6、清液在72h內(nèi)對AFB1(1μg/mL)的降解率為55.86％，而經(jīng)蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和熱處理后的上清液降解活性幾乎消失。硫酸銨沉淀的胞外蛋白對AFB1(1μg/mL)的降解率為30.21％～33.13％，而聚乙二醇6000濃縮8倍上清的降解率為85.65％。菌株S1發(fā)酵液與AFB1（200μg/mL）在37℃、180r/min條件下共培養(yǎng)72h，AFB1降解率為80.64％。降解后的AFB1在雞胚肝原代細胞中IL-6、TNF-