玉米赤霉烯酮降解菌的篩選、鑒定以及降解機理研究.pdf

1、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)，又稱F-2毒素，是一種由鐮刀菌產(chǎn)生的類雌激素樣真菌毒素。該毒素廣泛存在于霉變的玉米、高粱、小麥、燕麥、大麥等谷類作物的籽粒以及奶類中。ZEN具有類雌性激素毒性，不僅影響食物安全而且可以通過食物鏈在人體或動物體中造成蓄積，進而危害人和動物的健康。目前對于ZEN的脫毒處理主要借助于一些物理、化學和生物學手段破壞或降低其毒性。由于生物學方法可以克服傳統(tǒng)的物理和化學方法中存在的種種弊端，因而利用生

2、物學手段進行真菌毒素脫毒處理則是近年來研究的熱點和焦點。運用生物學方法篩選降解毒素的高效降解菌并將其應用于實踐，對保護人民身體健康，降低糧食、畜牧業(yè)的經(jīng)濟損失有積極意義。本論文主要通過對ZEN降解菌株的篩選，獲得具有ZEN降解能力的菌株，并研究該菌株的ZEN降解能力、降解機理及其降解影響因素。本研究分為四個部分：
　　 第一部分，ZEN的提純HPL檢測條件的優(yōu)化。通過對ZEN毒素提純條件的優(yōu)化，為ZEN降解菌的篩選提供較純的降解

3、底物;HPLC檢測條件的優(yōu)化，為ZEN降解率測定提供了靈敏、可靠的分析方法和試驗數(shù)據(jù)，同時也保證了后續(xù)實驗的順利進行。結果表明，優(yōu)化的ZEN提取條件為，試驗采用甲醇和NaCl溶液為提取劑、超聲提取，濕填硅膠小柱凈化，簡化了樣品前處理步驟，提高了凈化效果。優(yōu)化的HPLC檢測條件為，流動相為甲醇和水(80/20，V/V)，流速為0.6 ml·min-1，紫外檢測波長為236 nm，最低檢出限為5μg·kg-1，在1.25～40.00μg·m

4、l-1范圍內(nèi)，被測ZEN濃度與測定的峰面積呈線性關系（r=0.9991）;通過對檢測方法加標回收實驗，得到該檢測方法回收率約為96.3％。
　　 第二部分，ZEN降解菌株的篩選與鑒定。從受小麥赤霉病長期污染的土壤中富集篩選到一株ZEN降解菌，試驗發(fā)現(xiàn)該菌株具有較強的ZEN降解能力。通過對該菌株進行形態(tài)觀察，生理生化特性測定及其系統(tǒng)發(fā)育地位的分析，該菌株被初步鑒定為該菌株屬于解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquef

5、aciens)，其16S rDNA序列在GenBank上的登錄號為HM372880。本實驗室將其命名為:玉米赤霉烯酮降解菌(zearalenonedegradation bacterium, ZDS)。
　　 第三部分，觀察了外界因素對降解率的影響。主要的影響因素有溫度、培養(yǎng)基初始pH值、搖床轉(zhuǎn)速、接種量、裝液量等。結果發(fā)現(xiàn)，ZDS對ZEN降解的最適條件是:溫度為30℃、pH值為7.0、搖床轉(zhuǎn)速180 rpm、接種量5％、裝液量

6、20 ml·50 ml-1。該菌株在最適降解條件下，能夠在一周內(nèi)完全降解濃度為50 ppm的ZEN且隨著ZEN濃度的增高降解率逐漸降低，當ZEN濃度高于100 ppm時，降解率幾乎為0。
　　 第四部分，對菌株降解機理進行了初步的探討。利用硫酸銨沉淀的方法確定沉淀降解活性物質(zhì)，同時對沉淀的降解活性物質(zhì)粗提液部分特性進行初步研究。結果表明，用飽和度為40％的硫酸銨進行沉淀，降解活性物質(zhì)粗提液的降解活性最強，并初步確定菌株ZDS降解