奶牛產(chǎn)后生殖機能恢復(fù)與生長抑素基因免疫.pdf

1、繁殖力和泌乳性能是反映奶牛生產(chǎn)性能的重要因素,闡明奶牛生殖系統(tǒng)發(fā)育/恢復(fù)規(guī)律,對于最大限度發(fā)揮奶牛繁殖潛能、開發(fā)繁殖新技術(shù)具有重要的意義:而利用現(xiàn)代生物技術(shù),提高奶牛泌乳水平,是提高奶牛養(yǎng)殖經(jīng)濟效益的關(guān)鍵。本研究首先利用B型超聲波診斷技術(shù)研究不同胎次奶牛產(chǎn)后子宮復(fù)舊與卵巢機能恢復(fù)的規(guī)律,為提高奶牛產(chǎn)后繁殖力進而促進奶牛生產(chǎn)提供理論依據(jù)；之后利用基因免疫技術(shù)研究生長抑素基因免疫對奶牛生殖機能恢復(fù)和泌乳性能的作用,為開發(fā)提高奶牛繁殖力和泌乳

2、力的基因疫苗奠定基礎(chǔ)。在用新型生長抑素DNA疫苗--pVGS/2SS-asd免疫奶牛前,首先利用大鼠模型進行試驗,探討其對大鼠繁殖及泌乳性能的影響,并對其可能存在的安全性問題進行評價,為應(yīng)用大動物(如奶牛)提供依據(jù)。然后將pVGS/2SS-asd生長抑素DNA疫苗免疫產(chǎn)后奶牛,研究其對奶牛產(chǎn)后繁殖及泌乳性能的影響。
　　 1.奶牛產(chǎn)后子宮復(fù)舊與卵巢機能恢復(fù)規(guī)律研究
　　 良好的子宮復(fù)舊和卵巢活動對產(chǎn)后奶牛再次受孕并縮短產(chǎn)

3、犢間隔是非常重要的。本研究的目的是在產(chǎn)后營養(yǎng)和泌乳條件相對一致的情況下,評估胎次對中國荷斯坦奶牛產(chǎn)后子宮復(fù)舊和卵巢活動恢復(fù)的影響。選取46頭中國荷斯坦奶牛,其中初產(chǎn)18頭、產(chǎn)第二胎13頭、經(jīng)產(chǎn)15頭。奶牛產(chǎn)后子宮和卵巢檢測采用超聲波診斷技術(shù),干物質(zhì)攝入量(DMI)、產(chǎn)奶量、體況評分(BCS)測定依據(jù)DHI(奶牛群體改良)標準方法,奶樣中雌二醇濃度(E2)測定采用放射免疫測定(RIA)方法。結(jié)果顯示,初產(chǎn)奶牛的子宮孕角恢復(fù)時間(天數(shù))顯著

4、多于其他胎次的奶牛。就產(chǎn)后首次和第二次排卵的間隔天數(shù)及產(chǎn)后首次排卵前的卵泡波數(shù)目而言,初產(chǎn)奶牛也比其他胎次奶牛多?？傊?中國荷斯坦奶牛在相似的營養(yǎng)和泌乳條件下,隨著胎次的增長,奶牛產(chǎn)后子宮復(fù)舊與卵巢活動恢復(fù)時間明顯縮短。
　　 2.生長抑素基因免疫對大鼠繁殖和泌乳性能的影響
　　 為了探討新型生長抑素DNA疫苗-pVGS/2SS-asd對大鼠繁殖和泌乳性能的影響,同時分析疫苗劑量和注射方式對免疫效果的影響,將216只SD

5、雌性大鼠隨機分為9組,每組24只。試驗組:T1～T3組大鼠按高(2×109 CFU)、中(2×108 CFU)、低(2×107 CFU)三種劑量進行股四頭肌兩點注射pVGS/2SS-asd重組菌200μL:T4～T6組所用疫苗及其用量對應(yīng)于T1～T3組,進行背部皮下注射。對照組:C0組注射10％鋁膠生理鹽水(肌肉注射和皮下注射各半):C1組肌肉注射2×109 CFU不含質(zhì)粒的C500菌200μL；C2組皮下注射2×109 CFU不含質(zhì)粒

6、的C500菌200μL。各組在首次免疫后間隔4周,用同等劑量疫苗進行加強免疫2次。結(jié)果表明,這種新型pVGS/2SS-asd生長抑素DNA疫苗對大鼠有很好的免疫原性,能誘導(dǎo)高水平的免疫應(yīng)答,而且通過加強免疫能在整個試驗期保持較長時間(約11～13周)。在免疫方式上,肌肉注射在誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體水平的絕對值(OD=0.823±0.075)和免疫應(yīng)答的持久性(約13周)方面比皮下注射有優(yōu)勢。在免疫劑量上,并不存在劑量依賴關(guān)系,兩種免疫方式均以中劑

7、量優(yōu)勢明顯。無論是肌肉注射或皮下注射,三種免疫劑量都對大鼠繁殖性能沒有影響,但間接促進了產(chǎn)后泌乳期仔鼠的生長,改善了大鼠的泌乳性能。其中以肌肉注射的中劑量組的仔鼠斷奶窩增重(215.8±18.8g)明顯高于其他各組,與對照組相比差異顯著。皮下注射的中劑量組次之(212.2±13.6g)。
　　 3.生長抑素基因疫苗染色體整合的安全性評價
　　 在用pVGS/2SS-asd生長抑素DNA疫苗肌肉注射和皮下注射SD大鼠試驗結(jié)

8、束時,采集各組母鼠的心、肝、脾、肺、腎、卵巢和肌肉以及斷奶仔鼠的心、肝、脾、肺和腎等組織,提取基因組DNA,采用PCR方法檢測質(zhì)粒DNA與宿主染色體整合情況。結(jié)果表明,未發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒整合至母鼠和仔鼠基因組DNA中,揭示生長抑素DNA疫苗在染色體整合方面對大鼠是安全的。
　　 4.生長抑素基因免疫對奶牛繁殖和泌乳性能的影響
　　 為了探討新型生長抑素DNA疫苗-pVGS/2SS-asd對產(chǎn)后奶牛繁殖和泌乳性能的影響,將40頭產(chǎn)

9、后奶牛隨機分為4組,每組10頭。3個試驗組奶牛從奶牛產(chǎn)后第7d開始,分高(1×1011 CFU)、中(1×1010 CFU)、低(1×109 CFU)三種劑量肌肉注射pVGS/2SS-asd重組菌1mL,對照組肌肉注射10％鋁膠生理鹽水1mL。首次免疫(注射當天0d)后間隔4周,用同等劑量疫苗加強免疫2次。結(jié)果表明,pVGS/2SS-asd生長抑素DNA疫苗對奶牛有很好的免疫原性,各劑量組均能誘導(dǎo)一定強度的免疫應(yīng)答。高劑量組在誘導(dǎo)產(chǎn)生抗