28816.水飛薊賓干預(yù)棕櫚酸誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗作用的研究

1、DissertationSubmittedtoZhejiangUniversityofTechnology⑧fortheDegreeofMaster一‘1‘p一’‘‘●一‘‘InterventionOtSilibinininInsulinResistanceinSkeletalMuscleCellsInducedbyPalmitateCandidate：YingDingAdvisor：HanbingLiCollegeofPharmace

2、uticalScience，ZhejiangUniversityofTechnologyMay，2014浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文水飛薊賓干預(yù)棕櫚酸誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗作用的研究摘要目的：探究體外培養(yǎng)C2C12骨骼肌成肌細(xì)胞的增殖分化過(guò)程及特征，優(yōu)化培養(yǎng)分化條件，建立基于熒光標(biāo)記的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)模型，利用棕櫚酸孵育誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗，探討水飛薊賓對(duì)胰島素抵抗的干預(yù)作用及相關(guān)機(jī)制。方法：(1)用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)C2

3、C12細(xì)胞，通過(guò)形態(tài)學(xué)考察來(lái)檢測(cè)其增殖狀況；待細(xì)胞成長(zhǎng)到匯合至80～90％，用含1％胎牛血清(v／v)和含2％馬血清(v／v)的培養(yǎng)基分別誘導(dǎo)細(xì)胞分化，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。Hoechst染色，熒光顯微鏡觀察：(2)利用熒光探針2NBDG表征骨骼肌細(xì)胞攝取葡萄糖，應(yīng)用酶標(biāo)儀和熒光顯微鏡考察細(xì)胞對(duì)2NBDG的轉(zhuǎn)運(yùn)，評(píng)估其作為光學(xué)探針檢測(cè)骨骼肌細(xì)胞攝取葡萄糖的能力確定其最佳作用濃度和最佳作用時(shí)間；(3)棕櫚酸孵育骨骼肌細(xì)胞16h，

4、通過(guò)考察骨骼肌細(xì)胞在胰島素刺激下對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)，評(píng)價(jià)飽和脂肪酸棕櫚酸對(duì)骨骼肌細(xì)胞胰島素敏感性的影響，建立胰島素抵抗模型：(4)考察骨骼肌細(xì)胞葡萄糖攝取和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(GLUT4)的表達(dá)和轉(zhuǎn)位的變化：利用Westernblot檢測(cè)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵環(huán)節(jié)AKT、pAKT(Ser473)、pIRS—l(Ser307)和相關(guān)絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶pJNK、pigaq3、pPKC一0的表達(dá)，同時(shí)分析細(xì)胞活力、乳酸脫氫酶(LDH)和活性氧(RO

5、S)的變化，探討水飛薊賓改善飽和脂肪酸誘導(dǎo)的骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗的作用機(jī)制。結(jié)果：(1)正常C2C12細(xì)胞呈梭形，誘導(dǎo)分化過(guò)程中多個(gè)細(xì)胞發(fā)生融合成一個(gè)細(xì)胞，并且細(xì)胞呈現(xiàn)極性，規(guī)律性的沿一個(gè)方向逐漸平行排列，形成肌管，Hoechst染色可見(jiàn)多個(gè)細(xì)胞核。2％的馬血清誘導(dǎo)細(xì)胞分化形成的肌管較為粗壯，數(shù)量較少，l％的胎牛血清誘導(dǎo)細(xì)胞分化形成的肌管較為細(xì)長(zhǎng)，但數(shù)量較多。(2)肌管攝取2NBDG最佳濃度為100“molL～，最佳時(shí)間為30min。(