苯醚甲環(huán)唑誘導HepG2細胞毒性及其與CYP3A4相互作用機制研究.pdf

1、苯醚甲環(huán)唑作為三唑類殺菌劑中的一種被廣泛運用于各種農作物的殺菌防治。在多種環(huán)境介質與生物體內殘留，其潛在的生物毒性引起了國內外環(huán)境學與毒理學研究者的高度關注。本文選取苯醚甲環(huán)唑(Difenoconazole)作為研究對象，研究了其對人肝癌細胞HepG2的毒性機制及其對CYP3A4酶活性的抑制作用。主要獲取的結果與結論如下:
　　(1)文中采用MTT、western blot、流式細胞術、熒光共聚焦等實驗方法對其產生的細胞毒性進行研

2、究。結果發(fā)現苯醚甲環(huán)唑能夠誘導人肝癌細胞HepG2存活率的降低，并隨著濃度的上升存活率明顯下降;在細胞核形態(tài)上亦發(fā)生明顯的裂解;能顯著調節(jié)凋亡相關蛋白Caspase-8、9及PARP的表達，并呈現出一定的劑量效應及時間效應;其誘導活性氧ROS的產生，且同時產生于線粒體和內質網;在凋亡早期，線粒體膜電位隨著濃度的上升明顯下降，細胞色素C(Cyto.c)從線粒體釋放到胞漿中;內質網應激相關蛋白也呈現一定的趨勢，說明苯醚甲環(huán)唑誘導HepG2發(fā)

3、生凋亡有通過內質網應激途徑;苯醚甲環(huán)唑誘導HepG2細胞凋亡是ROS介導的線粒體途徑和內質網應激途徑共同作用的。
　　(2)本文采用實時定量熒光PCR發(fā)現苯醚甲環(huán)唑直接作用于細胞對CYP3A4基因并沒有明顯的調控作用;western blot實驗結果表明CYP3A4蛋白的表達也沒有明顯的改變;最后采用純蛋白研究苯醚甲環(huán)唑對于CYP3A4酶的活性的影響，結果顯示苯醚甲環(huán)唑能夠強烈地抑制CYP3A4酶的活性。
　　本研究發(fā)現了苯