槲皮素對HepG2細胞二相酶的誘導(dǎo)作用.pdf

1、目的：研究槲皮素對HepG2細胞中三種二相酶的誘導(dǎo)作用并探索其濃度和時間依賴性及對細胞氧化損傷的保護作用。 方法： 1．槲皮素對HepG2細胞二相酶的誘導(dǎo)作用。 培養(yǎng)狀態(tài)良好的HepG2細胞，隨機分為四組：對照組；低、中、高濃度槲皮素組（10 μM、20 μM、40 μM）。藥物與細胞共同孵育6、24小時分別測定以下指標：采用黃嘌呤氧化酶法測定胞漿內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活性；采用化學(xué)分光度法測定過氧化氫酶（C

2、AT）和醌氧化還原酶1（NQO1）的活性；用免疫印跡法（Western blotting）測定胞漿中醌氧化還原酶1（NQO1）及胞核中轉(zhuǎn)錄因子Nrf2的蛋白表達。 2．槲皮素對H2O2損傷的HepG2的保護作用測定。 培養(yǎng)狀態(tài)良好的HepG2細胞，隨機分為五組：對照組；H2O2損傷組（終濃度為2．4mM）；低、中、高濃度藥物組（10μM、20μM、40μM）。損傷組和藥物組加入H2O2，半小時后藥物組加入低、中、高濃度的

3、槲皮素，繼續(xù)培養(yǎng)6小時進行以下實驗：采用MTT法測定細胞存活率；采用生化全自動分析儀測定細胞上清液中AST活性；采用黃嘌呤氧化酶法測定細胞上清液中SOD活性。 結(jié)果： 1．槲皮素與細胞共同孵育6小時后，與對照組相比，藥物組的細胞內(nèi)二相酶SOD、CAT和NQO1活性均明顯提高（P<0．01，P<0．01，P<0．01），且呈濃度依賴性。24小時時，上述三種酶的活性均有不同程度的降低，呈一定的時間相關(guān)性。 2．槲皮素

4、與細胞共同孵育6小時后，與對照組相比，低、中、高濃度藥物組細胞內(nèi)NQO1和Nrf2的蛋白表達顯著提高（P<0．01，P<0．01）。 3．H2O2刺激細胞后，與對照組相比，損傷組細胞生存率和SOD活性明顯下降，AST活性明顯增高（P<0．01，P<0．01，P<0．01），槲皮素與細胞共同孵育后，與損傷組相比，藥物組生存率和SOD活性均顯著提高（P<0．01，P<0．05），AST活性顯著下降（P<0．05，P<0．01），呈濃