芍藥苷抑制NF-κB活性對(duì)人胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的：胃癌是目前最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。主要治療手段為手術(shù)和化療，但是許多患者就診時(shí)往往已處于晚期，失去手術(shù)機(jī)會(huì)，此時(shí)化療成為主要的姑息治療手段。近年來(lái)隨著新一代化療藥物的應(yīng)用，其療效得到了一定的提高，但生存期的改善仍不能令人滿意。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌對(duì)化療藥物的耐藥是治療失敗的主要原因，而在眾多耐藥機(jī)制中，胃癌細(xì)胞對(duì)凋亡的抵抗占有重要地位。所以深入研究凋亡發(fā)生的機(jī)制，尋找逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞凋亡抵抗的分子靶點(diǎn)成為目前研究的熱點(diǎn)之一。NF-kB信

2、號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路因其在凋亡抵抗中可能的重要作用而備受關(guān)注。NF-kB作為一種普遍存在的轉(zhuǎn)錄因子，可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答等，近年來(lái)研究表明它與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及凋亡抑制和誘導(dǎo)耐藥關(guān)系密切。尋找天然的NF-kB活性抑制劑，阻斷NF-kB抑制細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，將有可能為惡性腫瘤的治療提供有應(yīng)用前景的靶向治療手段?；贜F-kB可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的事實(shí)，我們研究了具有抗炎、抗風(fēng)濕作用的中藥有效成分芍藥苷對(duì)NF-kB活性的影響，以及對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和

3、凋亡的效應(yīng)，初步探討了芍藥苷影響NF-kB活性的作用機(jī)制。 方法：1.MTT法檢測(cè)芍藥苷單獨(dú)應(yīng)用或聯(lián)合化療藥物5-FU對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖的影響。2.應(yīng)用Western Blot方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組胞核NF-kB表達(dá)情況，并檢測(cè)NF-kB信號(hào)通路上游的多種胞漿蛋白表達(dá)。3.應(yīng)用胞核NF-kB活性檢測(cè)手段(ELISA法)進(jìn)一步確定胞核內(nèi)NF-kB的表達(dá)情況。4.免疫熒光法直觀觀察應(yīng)用芍藥苷前后NF-kB移位情況。5.RT-P

4、CR檢測(cè)應(yīng)用芍藥苷前后IkBa mRNA的表達(dá)。6.流式細(xì)胞儀檢測(cè)芍藥苷單獨(dú)應(yīng)用或與化療藥物5-FU聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果：1.不同濃度芍藥苷、5-FU作用于胃癌SGC-7901細(xì)胞后，對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率的影響呈現(xiàn)濃度依賴性。濃度越高，細(xì)胞增殖抑制率則越高。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥細(xì)胞抑制率明顯上升。芍藥苷100μg/ml培養(yǎng)48小時(shí)細(xì)胞抑制率為17％，5-FU5μg/ml 胞抑制率為8％。而兩者聯(lián)合細(xì)胞抑制率為29％。2.芍藥苷

5、對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞胞核NF-rB表達(dá)有明確的抑制作用，Western Blot以及胞核NF-kB活性檢測(cè)結(jié)果均顯示這種抑制存在著時(shí)間及劑量依賴現(xiàn)象。芍藥苷100μg/ml 養(yǎng)48小時(shí)后細(xì)胞核內(nèi)NF-kB的表達(dá)量?jī)H為正常對(duì)照的一半(P<0.01)。免疫熒光法也進(jìn)一步證明芍藥苷應(yīng)用前后NF-kB熒光強(qiáng)度的變化。3.針對(duì)NF-kB信號(hào)途徑上游分子的檢測(cè)表明，應(yīng)用芍藥苷后IkBa表達(dá)上調(diào)，P-IkBa表達(dá)下調(diào)。而更上游的IKKa表達(dá)無(wú)變

6、化。4.RT-PCR法檢測(cè)不同藥物組IkBa mRNA的表達(dá)情況未發(fā)現(xiàn)顯著差異(P>0.05)。5.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示芍藥苷對(duì)5-FU誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡有明顯的促進(jìn)作用，對(duì)照組細(xì)胞凋亡率約為4.9％，單用5-Fu時(shí)為7.4％，單用芍藥苷為11.9％，聯(lián)合用藥組凋亡率為25.9％(P<0.01)。 結(jié)論：1.芍藥苷可通過(guò)抑制NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路增強(qiáng)5-FU誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖抑制和凋亡效應(yīng)。2.該藥產(chǎn)生的效應(yīng)是通過(guò)阻滯IkBa的磷