雷替曲塞對胃癌細胞增殖、凋亡的影響及其機制研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在通過體內(nèi)外實驗研究雷替曲塞對胃癌細胞增殖、凋亡的影響，并對有關作用的特點及其機制進行深入探討，為雷替曲塞治療胃癌的臨床研究提供可靠的實驗數(shù)據(jù)和理論支持。
　　方法：
　　（1）體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細胞，采用CCK-8法檢測雷替曲塞在不同濃度和作用時間下對各組細胞的增殖抑制作用。（2）通過Hoechst33258熒光染色法，觀察雷替曲塞對胃癌細胞凋亡形態(tài)學的改變。（3）采用流式細胞儀法，檢

2、測雷替曲塞作用胃癌細胞后凋亡程度變化及細胞周期分布阻滯情況；并進一步分析雷替曲塞對線粒體膜電位及活性氧含量的影響。（4）Western Blot法檢測雷替曲塞應用對凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2、cyt-c和caspase-3表達的影響。（5）構(gòu)建胃癌裸鼠移植瘤模型，觀察不同劑量雷替曲塞在體內(nèi)對胃癌生長的抑制作用；免疫組化法檢測對照組與不同劑量實驗組之間Ki67、PCNA表達的差異；TUNEL法觀察腫瘤組織中胃癌細胞的凋亡情況；并通過W

3、estern Blot法檢測Bax和caspase-3蛋白的表達變化。
　　結(jié)果：
　?。?）雷替曲塞對人胃癌SGC-7901細胞具有增殖抑制作用，呈現(xiàn)明顯的時間和劑量依賴性。（2）雷替曲塞能夠誘導胃癌細胞發(fā)生凋亡，Hoechst33258染色可見核固縮、核碎裂及凋亡小體等典型的細胞凋亡形態(tài)學變化。（3）雷替曲塞明顯地阻滯細胞周期于G0/G1期，而使較少的細胞停留在G2/M期。（4）雷替曲塞可使細胞線粒體膜電位下降、活性氧含

4、量升高。（5）雷替曲塞能夠增強細胞中Bax、cyt-c、caspase-3蛋白的表達，并抑制Bcl-2蛋白的表達。（6）通過建立胃癌裸鼠移植瘤模型，發(fā)現(xiàn)雷替曲塞能夠顯著抑制胃癌裸鼠移植瘤的生長；免疫組化結(jié)果顯示，雷替曲塞抑制了移植瘤組織中Ki67、PCNA表達水平；TUNEL法驗證了雷替曲塞具有誘導移植瘤細胞凋亡的作用，其可能與增強Bax、caspase-3蛋白的表達水平有關。
　　結(jié)論：
　?。?）體外實驗中，雷替曲塞對胃

5、癌細胞具有一定的增殖抑制作用，促進細胞凋亡，阻滯細胞周期于G0/G1期，并使細胞線粒體膜電位下降、活性氧含量升高；其機制可能是通過上調(diào)Bax、cyt-c、caspase-3表達、下調(diào)Bcl-2表達而實現(xiàn)的。（2）體內(nèi)實驗中，雷替曲塞能夠抑制胃癌裸鼠移植瘤的生長，降低Ki67、PCNA的表達；同時通過提高Bax、caspase-3的表達來誘導細胞發(fā)生凋亡。（3）本研究為雷替曲塞治療胃癌提供了實驗室數(shù)據(jù)，亦為今后開展相關臨床研究提供了理論依