BMSCs聯(lián)合促紅細胞生成素治療大鼠脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、目的:構建穩(wěn)定的SD大鼠脊髓損傷模型，探討骨髓間充質干細胞(BMSCs)聯(lián)合促紅細胞生成素(EPO)對其修復的作用機制。
　　方法:1.采用全骨髓培養(yǎng)法獲取BMSCs，利用流式細胞儀檢測P2、P3代細胞表型以鑒定細胞。2.采用Hatteras Instruments PCI3000精密打擊器，設置打擊參數(shù)，建立T10節(jié)段的SD大鼠脊髓損傷模型。3.120只SD雄性大鼠完全隨機分為四組，每組30只，A組為損傷對照組，B組為EPO治療

2、組，C組為BMSCs治療組，D組為BMSCs聯(lián)合EPO治療組。術后1、3、7、14、28天每組分別取6只大鼠，采用BBB評分評價雙后肢運動功能后進行組織學檢測，觀察細胞凋亡率和NF-200的表達量，其中C組和D組還檢測BrdU標記的BMSCs在損傷區(qū)的陽性率。采用軟件SPSS19.0對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　結果:1.BMSCs經全骨髓法培養(yǎng)3代以內均具有典型成纖維樣細胞形態(tài)而且貼壁生長;細胞表型(CD29、 CD90、CD3

3、4、CD45)陽性率檢測結果:P2代分別為91.5％、96.2％、1.3％、8.0％; P3代分別為98.2％、98.1％、0.6％、2.0％。2.細胞生長曲線結果表明，以濃度8×104/ml接種，細胞增殖速度快，獲得的細胞總數(shù)多。3.BBB運動功能評分結果，術后7、14、28天，B、C、D組明顯高于A組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05);D組明顯高于B、C組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。4.細胞凋亡指數(shù)結果，術后1天損傷區(qū)細胞明

4、顯凋亡，3天達到高峰，以后逐漸下降，各時間段內組間比較均為:A＞B＞C＞D，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。5.NF-200表達水平術后迅速下降，3天下降水平達到高峰，以后表達逐漸升高，各時間段內組間比較均為:A＜B＜C＜D，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。6.BrdU標記的BMSCs陽性率在術后各時間段D組均明顯高于C組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論:1.第3代大鼠骨髓間充質干細胞可作為脊髓損傷移植的種子細胞