紫草素誘導白血病HL-60細胞凋亡及其機制研究.pdf

1、目的:本實驗旨在研究從中藥紫草科植物紫草中提取分離出來的有效成分萘醌類化合物紫草素在體外對人早幼粒白血病細胞HL-60細胞增殖的抑制、誘導凋亡的作用。
　　方法:
　　1.將不同濃度的紫草素0、1、2、4、8mg/ml加入到早幼粒白血病細胞HL-60細胞培養(yǎng)體系，MTT比色法檢測紫草素對HL-60細胞增殖的影響。
　　2.用Annexin V/PI雙標記流式細胞術檢測加入不同濃度紫草素及不同時間段的早幼粒白血病細胞HL

2、-60細胞凋亡率。
　　3.用半定量逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測BCL-2基因水平，分析白血病HL-60細胞凋亡作用與Bcl-2蛋白表達水平。
　　結果:
　　1.MTT測定顯示紫草素體外中、高濃度（1～8ug/ml）作用于人白血病HL-60細胞48h、72h,能夠明顯的增殖抑制作用，且呈現(xiàn)時間和劑量-效應依賴關系。紫草素1～8ug/ml抑制率分別為23.0±8.2％～73.0±1.3%（P均<0.01）。

3、
　　2.Annexin V/PI分析結果顯示紫草素能夠誘導HL-60細胞凋亡，Annexin V陽性細胞百分率明顯增加，凋亡率呈時間和劑量依賴性。經(jīng)紫草素濃度為1、2、4mg/ml時作用于HL-60細胞24、48、72小時后，凋亡率分別為1.7%～14.7%（P均<0.01）。
　　3.半定量RT-PCR結果顯示紫草素作用下，白血病HL-60細胞Bcl-2基因表達明顯下調，泳道灰度減去陰性對照后與β-actin條帶灰度的比