SPARC調節(jié)糖酵解影響肝癌細胞對5-FU敏感性的研究.pdf

1、目的：探討肝細胞癌中SPARC對糖酵解的調節(jié)作用及其分子機制，為SPARC作用于5-Fu耐藥的肝癌細胞，使耐藥肝癌細胞對5-Fu重新敏感的臨床應用提供理論基礎及實驗依據。
　　方法：本研究選取HepG2,Hep3B,Huh7三株肝癌細胞，轉染SPARC或siRNA SPARC后,應用比色法分別檢測轉染后的三株肝癌細胞中葡萄糖攝取量以及乳酸生成量以及糖酵解轉運蛋白Glut1和關鍵酶HKⅡ、LDHA的活性變化；應用低濃度逐漸遞增的5-

2、FU誘導生成耐藥HepG2細胞；Western blotting法檢測缺糖條件下SPARC、AMPK、Thr-172 AMPK的表達情況，及5-FU耐藥HepG2細胞和敏感細胞中糖酵解代謝關鍵酶的變化情況；RT-PCR法檢測糖酵解關鍵基因Glut1、HKⅡ、LDHA的mRNA水平；在耐藥細胞中敲除Glut1、HKⅡ、LDHA的表達，或轉染SPARC，或瞬時共轉染SPARC與糖酵解關鍵基因Glut1、HKⅡ、LDHA，分別應用臺盼藍拒染法

3、比較處理前后細胞對5-FU敏感性的變化，并應用該方法檢測缺糖環(huán)境下SPARC對于HepG2細胞活力的影響。
　　結果：過表達SPARC的肝癌細胞中葡萄糖攝取及乳酸生成量明顯下降，糖酵解轉運蛋白Glut1及關鍵酶HKⅡ、LDHA的活性下調，反之，轉染siRNA SPARC的肝癌細胞中糖酵解作用上調；過表達SPARC的HepG2細胞在缺糖條件下細胞活力下調幅度較對照組減少，同時AMPK、Thr-172 AMPK的表達上調；5-FU耐藥

4、肝癌細胞中糖酵解關鍵基因Glut1、HKⅡ、LDHA的mRNA水平及蛋白水平上調；5-FU作用于過表達SPARC的HepG2細胞時，細胞活力較對照組明顯下降；耐藥HepG2細胞中SPARC過表達時，細胞對5-FU的敏感性提高，當瞬時共轉染SPARC與糖酵解關鍵基因時，細胞對5-FU不再重新獲敏。
　　結論：肝細胞癌中，SPARC通過下調糖酵解的葡萄糖轉運蛋白Glut1及關鍵酶HKⅡ、LDHA負性調控糖酵解作用；SPARC能夠促使肝