MK-ASODN增強(qiáng)絨毛膜癌細(xì)胞對(duì)5-FU化療敏感性的研究.pdf

1、目的:初步探討中期因子(Midkine，MK)的反義寡核苷酸片段(Antisense Oligodeoxynucleotides，ASODN)在5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）對(duì)絨毛膜癌（choriocarcinoma，絨癌）細(xì)胞化療中的增敏作用，并進(jìn)一步研究其增敏效應(yīng)的相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:1.化學(xué)合成MK-ASODN及相應(yīng)對(duì)照的無(wú)義寡核苷酸片段(Nonsense Oligodeoxynucleotid

2、es，NSODN)，以脂質(zhì)體為載體轉(zhuǎn)染絨癌JEG-3細(xì)胞，并以RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果。
　　 2.用MTS比色分析法觀察5-FU對(duì)MK-ASODN實(shí)驗(yàn)組與MK-NSODN對(duì)照組絨癌JEG-3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況。
　　 3.用Anexin V-FITC雙染流式檢測(cè)凋亡試驗(yàn)觀察MK-ASODN實(shí)驗(yàn)組和MK-ASODN+5-FU聯(lián)合實(shí)驗(yàn)組以及相應(yīng)對(duì)照組絨癌JEG-3細(xì)胞的凋亡情況。
　　 4.用Western blo

3、t檢測(cè)MK-ASODN+5-FU聯(lián)合實(shí)驗(yàn)組與相應(yīng)對(duì)照組絨癌JEG-3細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)及其下游的Bcl-2蛋白水平。
　　 結(jié)果:1.相比于對(duì)照組，轉(zhuǎn)染MK-ASODN后可明顯下調(diào)MKmRNA表達(dá)水平。
　　 2.在同樣的5-FU濃度下，MK-ASODN實(shí)驗(yàn)組絨癌JEG-3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率均明顯高于其對(duì)照組;MK-ASOND下調(diào)MK表達(dá)能增加絨癌JEG-

4、3細(xì)胞對(duì)5-Fu的化療敏感性，與對(duì)照組相比，IC50值由54.83±4.86mg/L降為35.69±3.04mg/L(p＜0.05)。
　　 3.MK-NSODN對(duì)照組與MK-ASODN實(shí)驗(yàn)組兩組絨癌JEG-3細(xì)胞總凋亡率分別為0.54±0.10％和0.09±0.03％，其中早期凋亡率分別為0.27±0.09％和0.04±0.01％(p＜0.05); MK-ASODN使5-FU誘導(dǎo)的絨癌JEG-3細(xì)胞總凋亡率由28.99±2.0

5、4％增加到49.14±4.12％(p＜0.05)，其中早期凋亡率增加顯著，由16.63±2.45％增加38.28±4.41％(p＜0.05);
　　 4.MK-ASODN聯(lián)合5-FU可下調(diào)PI3K/Akt活性(p-PI3K，p-Akt)及其下游的Bcl-2的蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)論:1.絨癌JEG-3細(xì)胞轉(zhuǎn)染MK-ASODN后能下調(diào)MKmRNA表達(dá)。
　　 2.MK-ASODN使5-FU作用于絨癌JEG-3細(xì)胞