神經(jīng)病理性疼痛中星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活及與痛覺變化的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　 神經(jīng)病理性疼痛由于涉及到復(fù)雜的調(diào)控機(jī)理至今沒有行之有效的治療方法。傳統(tǒng)的研究認(rèn)為痛覺的傳導(dǎo)僅限于神經(jīng)元之間信號傳遞，而膠質(zhì)細(xì)胞被認(rèn)為不參與痛覺的信號傳導(dǎo)，僅對神經(jīng)元保護(hù)、支持、修復(fù)。然而近年來膠質(zhì)細(xì)胞特別是星形膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)病理性疼痛中的作用逐步受到學(xué)者們的重視。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過觀察大鼠坐骨神經(jīng)慢性結(jié)扎模型的脊髓中星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活情況及其與痛覺增強(qiáng)之間的關(guān)系，為星形膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)病理性疼痛中的作用提供基

2、礎(chǔ)研究資料。
　　 波形蛋白(Vimentin)主要表達(dá)于增殖期的星形膠質(zhì)細(xì)胞。研究表明Vimentin在脊髓橫斷條件下，可在成年大鼠脊髓的星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，在神經(jīng)性病理性疼痛的大鼠模型中其表達(dá)如何?本實(shí)驗(yàn)通過觀察大鼠CCI模型中脊髓第4～5腰椎段膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和Vimentin的表達(dá)分析其與神經(jīng)病理性疼痛的關(guān)系。
　　 文獻(xiàn)報(bào)道在神經(jīng)病理性疼痛中，脊髓p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和c-Ju

3、n氨基末端激酶(JNK)傳導(dǎo)通路均被激活。星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活與哪種細(xì)信號傳導(dǎo)通路有關(guān)?本實(shí)驗(yàn)通過觀察CCI模型中脊髓第4～5腰椎段磷酸化的p38絲裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表達(dá)與神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞之間的關(guān)系，探索神經(jīng)病理性疼痛中星形膠質(zhì)細(xì)胞被激活后的相關(guān)信號傳導(dǎo)通路。
　　 方法：
　　 1．建立坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型并觀察其熱痛閾和機(jī)械痛

4、閾的變化
　　 120只SD雄性成年大鼠被隨機(jī)分為2組：CCI模型組、假手術(shù)組(Sham組)。CCI模型組進(jìn)行右側(cè)坐骨神經(jīng)結(jié)扎術(shù)；假手術(shù)組僅暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)不予結(jié)扎。兩組大鼠于術(shù)前1d和術(shù)后1、3、7、14、28d分別測量(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組10只)后爪左右肢的熱痛閾(PWTL)和機(jī)械痛閾(MWT)，并進(jìn)行自身對照和組間對照。
　　 2．RT-PCR檢測GFAP和Vimentin mRNA在大鼠CCI模型中的相對表達(dá)量

5、>　　 兩組大鼠于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組取5只大鼠的脊髓第4～5腰椎段，RT-PCR檢測GFAP和Vimentin mRNA的相對表達(dá)量。
　　 3．熒光免疫組化檢測GFAP和Vimentin在大鼠CCI模型中的表達(dá)
　　 兩組大鼠于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組取5只大鼠的脊髓第4～5腰椎段做石蠟切片，熒光免疫組化標(biāo)記GFAP和Vimentin的表達(dá)，后選擇CCI組免疫熒光強(qiáng)度表達(dá)最強(qiáng)的時(shí)間點(diǎn)(術(shù)后7d)的脊髓切片進(jìn)行GFAP和Viment

6、in免疫熒光雙標(biāo)。并對CCI組術(shù)側(cè)PWTL值、MWT值與GFAP、Vimentin的平均熒光強(qiáng)度進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析。
　　 4．熒光免疫組化檢測p-p38MAPK、p-JNK在在大鼠CCI模型中的表達(dá)
　　 20只SD雄性成年大鼠被隨機(jī)分為2組：CCI模型組、假手術(shù)組。并與術(shù)前1d和術(shù)后7d取脊髓第4～5腰椎段做石蠟切片，熒光免疫組化標(biāo)記p-p38MAPK和p-JNK的表達(dá)，并分別與NeuN、GFAP、OX-42進(jìn)行免疫熒光

7、雙標(biāo)。
　　 結(jié)果：
　　 1．CCI模型熱痛閾和機(jī)械痛閾的變化
　　 CCI組術(shù)后出現(xiàn)結(jié)扎側(cè)腳趾并攏、屈曲、外翻等行為學(xué)變化。術(shù)后3～14dCCI組大鼠術(shù)側(cè)足MWT值、PWTL值明顯降低，與自身對照側(cè)及Sham組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2．GFAP和Vimentin mRNA在大鼠CCI模型脊髓中的相對表達(dá)量
　　 CCI組術(shù)側(cè)GFAP和Vimentin mRNA相對表達(dá)量

8、子術(shù)后3～14d顯著增強(qiáng)且與自身對照側(cè)及Sham組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3．GFAP和Vimentin在大鼠CCI模型脊髓中的表達(dá)情況
　　 CCI組脊髓背角術(shù)側(cè)GFAP和Vimentin的表達(dá)于術(shù)后3～14d明顯增強(qiáng)，陽性細(xì)胞數(shù)顯著增多，細(xì)胞體積變大，突起變長；且平均熒光強(qiáng)度明顯增高，與自身對照側(cè)及Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；術(shù)后7d的免疫熒光雙標(biāo)顯示兩者存在較好的分布一致區(qū)

9、。關(guān)聯(lián)性分析顯示MWT、PWTL值與GFAP、Vimentin的平均熒光強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　 4．p-p38MAPK和p-JNK在大鼠CCI模型脊髓中的表達(dá)情況
　　 CCI組p-p38MAPK、p-JNK免疫組化染色顯示數(shù)量較自身對照側(cè)和Sham組明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；免疫熒光雙標(biāo)顯示p-p38MAPK/OX-42，p-JNK/GFAP的表達(dá)存在較好的分布一致區(qū)。
　　 結(jié)