脊髓背角補(bǔ)體異?；罨c神經(jīng)病理性疼痛關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、一、研究背景 越來越多的研究表明，膠質(zhì)細(xì)胞激活是神經(jīng)病理性疼痛的充分和必要條件。補(bǔ)體蛋白作為膠質(zhì)細(xì)胞合成分泌的重要物質(zhì)，在中樞系統(tǒng)疾病發(fā)揮不可或缺的作用。關(guān)于補(bǔ)體活化在神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制中的作用，目前鮮有研究。2005年美國(guó)著名學(xué)者M(jìn)illigan等研究中發(fā)現(xiàn)，鞘內(nèi)注射可溶性補(bǔ)體受體l可逆轉(zhuǎn)神經(jīng)病理性疼痛模型動(dòng)物的痛覺過敏，從一定程度上反映了補(bǔ)體蛋白可能參與NPP的發(fā)生和發(fā)展。但是NPP時(shí)脊髓背角補(bǔ)體是否發(fā)生異常活化？補(bǔ)體表

2、達(dá)有無規(guī)律？Milligan并無研究。 二、目的 本研究觀察坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷誘發(fā)NPP模型大鼠脊髓背角補(bǔ)體C3變化，采用補(bǔ)體抑制劑-眼鏡蛇毒因子干預(yù)NPP模型大鼠脊髓補(bǔ)體表達(dá)，觀察它對(duì)大鼠痛閾的影響，進(jìn)而探討脊髓補(bǔ)體異?；罨贜PP形成中的作用。 三、方法 實(shí)驗(yàn)分三部分： 1.大鼠CCI模型的制作及行為學(xué)評(píng)估 SD大鼠36只，分為假手術(shù)組(sham組，n=12)、傳統(tǒng)坐骨神經(jīng)結(jié)扎組

3、(傳統(tǒng)CCI組，n=12)和改良坐骨神經(jīng)結(jié)扎組(改良CCI組，n=12)，觀察處理后2w內(nèi)自發(fā)痛、觸誘發(fā)痛及熱刺激痛覺過敏等行為學(xué)變化； 2.神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角補(bǔ)體C3mRNA及蛋白的表達(dá) SD大鼠84只，均分為7組，分別為正常對(duì)照組、假手術(shù)組1、3、7d組及坐骨神經(jīng)結(jié)扎后1、3、7d組，每組12只。按照分組在規(guī)定時(shí)間測(cè)定熱痛閾值和機(jī)械痛閾值后處死大鼠，采用RT-PCR技術(shù)測(cè)定IA-6脊髓中補(bǔ)體C3mRNA水平；

4、免疫組化測(cè)定LA-6脊髓背角補(bǔ)體C3陽性細(xì)胞情況；免疫比濁法測(cè)定脊髓勻漿補(bǔ)體C3濃度。 3.眼鏡蛇毒因子對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型的干預(yù)效應(yīng) SD大鼠48只，分為假手術(shù)+生理鹽水組(A組，n=12，在術(shù)前和術(shù)后每同持續(xù)尾靜脈注射生理鹽水)、CCI+生理鹽水組(B組，n=12，在術(shù)前和術(shù)后每日持續(xù)尾靜脈注射生理鹽水)、CCI+CVF組(C組，n=12，在術(shù)前和術(shù)后每日持續(xù)尾靜脈注射CVF50ug/kg)和CCI+生理鹽水+C

5、VF組(D組，n=12，在術(shù)后第4天尾靜脈注射CVF50ug/kg，其余時(shí)間給予同等容量的生理鹽水)，分別在術(shù)前和術(shù)后1、3、7、14天觀察大鼠自發(fā)痛及機(jī)械刺激痛覺過敏等行為學(xué)變化，兩周后處死大鼠，用免疫組化測(cè)定大鼠脊髓背角補(bǔ)體C3陽性細(xì)胞情況，免疫比濁法測(cè)定脊髓中補(bǔ)體C3濃度，透射電鏡觀察背角神經(jīng)元內(nèi)部結(jié)構(gòu)，分光光度法測(cè)定脊髓中SOD和MDA。 四、結(jié)果 1.傳統(tǒng)CCI組和改良CCI組術(shù)后均出現(xiàn)結(jié)扎側(cè)患足足趾并攏屈曲，

6、外翻，稱防御姿勢(shì)。自發(fā)性痛行為評(píng)分：假手術(shù)組大鼠姿勢(shì)、步態(tài)均為O分，傳統(tǒng)CCI組大和改良CCI組大鼠評(píng)分均在2～4分。與假手術(shù)組相比，傳統(tǒng)CCI組和改良CCI組術(shù)后均出現(xiàn)熱痛閾值和機(jī)械誘發(fā)痛閾值降低現(xiàn)象；與傳統(tǒng)CCI組相比，改良CCI組痛過敏穩(wěn)定、持久，自噬現(xiàn)象較傳統(tǒng)CCI組少。 2.CCI大鼠坐骨神經(jīng)結(jié)扎側(cè)后1、3、7天脊髓背角補(bǔ)體C3蛋白及mRNA都顯著表達(dá)，并呈進(jìn)行性升高趨勢(shì)，而假手術(shù)組無明顯變化；Pearson相關(guān)分析顯

7、示，CCI大鼠脊髓背角補(bǔ)體異?；罨癄顩r與大鼠痛覺過敏程度相關(guān)。 3.單次尾靜脈注射CVF可—過性提高模型大鼠痛覺閾值，并隨著藥物的代謝作用逐漸減弱；持續(xù)給予CVF可抑制大鼠痛覺過敏的發(fā)生；脊髓勻漿SOD和MDA測(cè)定結(jié)果顯示：與A組，相比，B組大鼠脊髓勻漿中SOD活力降低，MDA產(chǎn)物含量增多；與B組相比，C組大鼠脊髓勻漿中SOD活力升高，MDA產(chǎn)物含量下降。透射電鏡觀察，B組大鼠脊髓背角神經(jīng)元內(nèi)線粒體腫脹，核膜損傷；與B組相比，C