男性不育相關蛋白MLH1和miR-383在精子發(fā)生中的功能研究.pdf

1、男性不育是一個世界范圍性的生殖健康問題。更重要的是，近年來研究表明男性不育患者有易發(fā)睪丸癌的風險。然而，大部分非梗阻性無精癥（NOA）患者的病因不明（特發(fā)性不育），且臨床治療有限。一些研究表明減數(shù)分裂同源染色體重組缺陷以及生殖細胞增殖凋亡失衡可能是成熟抑制型NOA患者的潛在致病因素。因此，本文的目的是鑒定參與這些病理缺陷發(fā)生的調(diào)控因子及其途徑，并分析是否這一調(diào)控因子/途徑介導了不育患者的睪丸癌易感性。
　　 首先，需要了解正常情

2、況下男性同源重組的調(diào)控模式。重組過程涉及同源配對染色體間的交換位點（crossovers，Cos，由粗線期MLH1蛋白標記）形成。在人類中，Cos的分布受正干涉調(diào)控，即一個Cos的形成會抑制其它Cos在它鄰近形成，從而使Cos沿染色體分散排布。分析結果表明交換干涉可連續(xù)通過著絲粒起作用，且交換干涉水平在個體間、染色體間和染色體內(nèi)均存在顯著的變異，即小號染色體的干涉水平強于大號染色體，而臂間干涉強于臂內(nèi)干涉。此外，SCs對交換干涉水平大小

3、具有重要的調(diào)控作用，這主要表現(xiàn)在兩方面：1）交換干涉存在染色體間效應，而這種效應與SCs的長度相關，即兩長度類似的SCs上交換干涉水平更易發(fā)生相互關系；2）染色體結構異?？捎绊懜缮嫠?，如9號染色體上出現(xiàn)的不連續(xù)區(qū)域gaps及未聯(lián)會區(qū)域splits可cis/trans影響其本身和其它染色體上干涉水平。本文首次表明交換干涉水平在全基因組范圍內(nèi)存在顯著的異質(zhì)性，且至少在男性中，染色體聯(lián)會異常可導致交換干涉水平的改變。
　　 其次是鑒

4、定成熟抑制型NOA患者中病理缺陷發(fā)生的信號調(diào)控途徑。microRNAs(miRNAs)是一類小分子非編碼RNA，已有研究報道其在精子發(fā)生和腫瘤發(fā)生均扮演重要角色。為確定候選的功能性miRNAs，本文首先通過microarray技術篩選正常與不育患者中差異表達的miRNAs，發(fā)現(xiàn)154種顯著下調(diào)及19種顯著上調(diào)的miRNAs。從中選取下調(diào)比較顯著的miR-383為研究對象，原位雜交結果顯示miR-383主要表達于人精原細胞及初級精母細胞。

5、經(jīng)real-time PCR分析證實其在精子發(fā)生停滯的不育患者中出現(xiàn)顯著下調(diào)，而這種下調(diào)受到轉錄及轉錄后水平調(diào)控，且與不育患者中生殖細胞過度增殖有關。在睪丸癌細胞系Ntera-2 cells中沉默內(nèi)源的miR-383也促進癌細胞增殖及細胞周期G1/S 期轉變，同時抑制本底凋亡，而過表達miR-383則出現(xiàn)相反效應。
　　 進一步實驗表明miR-383通過影響mRNA穩(wěn)定性靶向轉錄因子interferon regulatory f

6、actor-1(IRF1)，且miR-383與IRF1在體內(nèi)存在負相關關系，同時miR-383可抑制IRF1的細胞周期相關靶基因cyclin D1、CDK2及p21表達。沉默內(nèi)源IRF1或cyclin D1，而非CDK2增強miR-383介導的抑增殖效應。沉默p21則對miR-383介導的抑增殖效應起負反饋調(diào)控作用。此外，miR-383可通過提高CDK4的蛋白酶體降解抑制其表達，最終導致G1期關鍵調(diào)控因子pRb磷酸化水平降低。這些研究結