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文檔簡介
1、目的：研究縫隙連接和縫隙連接蛋白在人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外向軟骨分化過程中的作用。
方法：體外培養(yǎng)人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs），取第3代細(xì)胞，以生長分化因子-5（GDF-5）（100ng/ml）和縫隙連接阻斷劑甘珀酸（carbenoxolone，CBX）（2μmol/L）干預(yù)培養(yǎng)，分3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，A：對照組。B：GDF-5組。C：CBX組。MTT法測定甘珀酸對人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響，免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測軟骨細(xì)胞特異性Ⅱ型
2、膠原的表達(dá)，Western blotting檢測Cx43蛋白的表達(dá)，阿辛蘭染色蛋白多糖，利用激光共聚焦檢測熒光并繪制熒光恢復(fù)曲線。
結(jié)果：MTT結(jié)果顯示2μmol/L濃度甘珀酸對hMSCs的增殖不產(chǎn)生影響，對細(xì)胞沒有毒性抑制作用；免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示CBX能夠抑制Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá)(p＜0.05)；Western blotting結(jié)果表明CBX對Cx43蛋白的表達(dá)無明顯作用；阿辛蘭染色結(jié)果顯示CBX酸抑制分化細(xì)胞分
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