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1、【目的】:研究人骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞(humanBonemarrowMesenchymal Stemcells,hBMSCs)在體外單層培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)為軟骨細(xì)胞可行性;研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與脫鈣骨復(fù)合物在三維誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下,回植到裸鼠皮下環(huán)境中組織形成情況,為軟骨組織工程臨床應(yīng)用提供初步實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù).【材料與方法】:應(yīng)用percoll密度梯度離心技術(shù),分離得到第一代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)誘導(dǎo).實(shí)驗(yàn)在兩種條件下進(jìn)行,即單層誘導(dǎo)培養(yǎng)和三
2、維誘導(dǎo)培養(yǎng)(支架為脫鈣骨),每種實(shí)驗(yàn)條件各設(shè)誘導(dǎo)組和未誘導(dǎo)組,誘導(dǎo)組用含有TGF—β3、地塞米松等特定誘導(dǎo)培養(yǎng)液進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),對照組的培養(yǎng)液為含10﹪FBS的DMEM.每天光鏡下觀察單層誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變,培養(yǎng)三天后免疫組化、原位雜交和RT-PCR等方法檢測膠原和糖蛋白的體外表達(dá)情況;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞-脫鈣骨復(fù)合物誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組和未誘導(dǎo)對照組體外培養(yǎng)6天,回植到裸鼠皮下,分別于2、4、6、8、10周取材.石蠟切片兔疫
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