C型清道夫受體在日本囊對蝦先天免疫中的功能研究.pdf

1、無脊椎動物主要依靠先天免疫系統(tǒng)抵御病原體的感染，在此過程中模式識別受體對病原微生物的識別是啟動先天免疫反應的關(guān)鍵步驟。在對蝦中，已發(fā)現(xiàn)的模式識別受體有十多種，但對C型清道夫受體及其功能了解的還不多。我們以日本囊對蝦Marsupenaeus japonicus為研究對象，發(fā)現(xiàn)了C型清道夫受體可以作為一種重要的模式識別受體促進對蝦血細胞對病毒和多種細菌的吞噬作用以及調(diào)節(jié)抗菌肽基因的表達。
　　(1)C型清道夫受體通過增強對蝦血細胞的吞

2、噬作用提高宿主抗病毒的能力
　　至今已在多種無脊椎動物中發(fā)現(xiàn)有C型清道夫受體(SRC)的存在，然而SRC在抗病毒方面的研究報道還很少。在本研究中，我們首次從日本囊對蝦，M.japonicus，中克隆到了一種SRC基因，并將其命名為MjSRC。當對蝦受到白斑綜合征病毒(WSSV)的刺激以后，MjSRC在mRNA以及蛋白水平呈顯著的上調(diào)表達。敲低MjSRC導致WSSV病毒的含量顯著增加。同時，過表達MjSRC會有效地提高血細胞的吞噬率

3、，從而降低對蝦體內(nèi)WSSV的含量。Pull-down實驗結(jié)果表明MjSRC可以與WSSV的囊膜蛋白VP19相互作用。透射電鏡的觀察結(jié)果顯示膠體金標記的MjSRC胞外域可以附著在WSSV的囊膜表面。在受到WSSV刺激后，MjSRC可以形成三聚體并伴隨病毒的內(nèi)吞而進入細胞質(zhì)，這類內(nèi)化過程依賴Mjβ-arrestin2的存在。進一步的實驗結(jié)果表明MjSRC的胞內(nèi)域可以與Mjβ-arrestin2相互作用，進而介導WSSV以網(wǎng)格蛋白依賴的方式進

4、入細胞質(zhì)。進入細胞質(zhì)的病毒與溶酶體融合，當注射溶酶體抑制劑（氯喹）以后，病毒的拷貝數(shù)顯著增加。本研究結(jié)果顯示MjSRC通過其胞外域識別并結(jié)合WSSV，啟動血細胞的吞噬作用，從而清除對蝦體內(nèi)的病毒。本文首次報道了SRC作為一種模式識別受體參與對病毒吞噬和清除。
　　(2)MjSRC在對蝦抗細菌感染中的功能研究
　　我們進一步研究了MjSRC作為模式識別受體參與細菌的的識別和清除的分子機制。當對蝦受到弧菌（Vibrio angu

5、illarum）或金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）刺激以后，MjSRC的mRNA水平在血細胞中顯著上調(diào)表達。MjSRC的胞外域(MAM和CCP結(jié)構(gòu)域）具有體外結(jié)合不同細菌以及細菌來源多糖的功能。在敲低MjSRC表達的情況下，對蝦血細胞的細菌清除能力和吞噬率與對照組相比顯著下降。此外，MjSRC具有調(diào)節(jié)抗菌肽(AMPs)基因表達的功能。綜上所述，MjSRC通過增強對蝦的細胞免疫和體液免疫有效地保護對蝦免受細菌的