膠質(zhì)細(xì)胞原性神經(jīng)營養(yǎng)因子微囊局部應(yīng)用于臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植動物模型的實驗研究.pdf

1、目的：在手術(shù)顯微鏡下建立臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根原位回植大鼠動物模型，并制備膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF微囊，觀察局部應(yīng)用GDNF(glialcellline-derivedneurotrophicfactor)微囊的臂叢神經(jīng)根原位回植后的實驗動物3、6個月后大鼠的神經(jīng)肌肉恢復(fù)情況及神經(jīng)根回植處脊髓及遠(yuǎn)端神經(jīng)纖維組織學(xué)改變，為臨床治療臂叢神經(jīng)根性撕脫傷提供一種思路或方法。 方法：第一部分：臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植實驗動物

2、模型的建立。成年雄性Wistar大鼠36只隨機分成實驗組和失神經(jīng)組。經(jīng)后入路將C6神經(jīng)根從脊髓上撕脫下來，并將C5、7、8及Tl神經(jīng)根自其穿出椎間孔處切斷，斷端結(jié)扎包埋，形成臂叢神經(jīng)根性撕脫模型。并對動物模型進(jìn)行電生理學(xué)，肱二頭肌肌肉濕重及組織學(xué)檢測。 第二部分：GDNF-PLGA微囊的制備及其特性測定。利用W/O/W復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制作GDNF-PLGA微囊，并對微囊的產(chǎn)率、載藥量、包裹率、微囊中藥物體外釋放及微囊內(nèi)GDNF生物

3、學(xué)活性進(jìn)行測定。 第三部分：GDNF-PLGA微囊促進(jìn)臂叢神經(jīng)根性撕脫傷后神經(jīng)根回植修復(fù)的實驗研究。將制備的GDNF-PLGA微囊放置于臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植的局部，并于3、6個月后進(jìn)行電生理學(xué)，肱二頭肌肌肉濕重及組織學(xué)檢測。 結(jié)果：l、術(shù)后3、6個月運動誘發(fā)電位的潛伏期明顯比正常對照側(cè)延長，差別十分顯著(p＜0.01)；波幅亦明顯較正常對照側(cè)為低，差別十分顯著(p＜0.01)；且3個月組運動誘發(fā)電位的潛伏期比6個

4、月組長，波幅較6個月組低，差別十分顯著(p＜0.01)。術(shù)后3、6個月肌肉濕重恢復(fù)率明顯高于失神經(jīng)組，差別十分顯著(p＜0.01)；且6個月組肌肉濕重恢復(fù)率比3個月組高，差別顯著(0.0l＜p＜0.05)。術(shù)后3、6個月時回植C6神經(jīng)根的再生有髓神經(jīng)纖維數(shù)量明顯少于正常對照組數(shù)量(0.0l＜p＜0.05及p＜0.01)，但隨時間的延長再生神經(jīng)纖維數(shù)量明顯增多，且6個月組明顯多于3個月組(p＜0.01)。 2、微囊符合無菌規(guī)定；微

5、囊呈球形，大小均一，表面光滑，分散好，成囊率為93％；微囊的產(chǎn)率為59.10％；微囊的載藥量及包裹率分別是0.154ug/mg和46％；制備的微囊體外藥物釋放過程中存在突釋現(xiàn)象，3天后藥物的釋放趨于穩(wěn)定，而且30天內(nèi)絕大多數(shù)藥物從微囊釋放出來；所制備的GDNF-PLGA微囊中的GDNF具有生物活性。 3、術(shù)后3、6個月運動誘發(fā)電位的潛伏期明顯比對照組短，差別顯著(p＜0.01及p＜0.05)；波幅亦明顯較對照組為高，差別顯著(p

6、＜0.01及p＜0.05)。術(shù)后3、6個月肌肉濕重恢復(fù)率與對照組差別無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。術(shù)后3、6個月時回植C6神經(jīng)根的再生有髓神經(jīng)纖維數(shù)量明顯多于對照組數(shù)量(p＜0.01及0.01＜p＜0.05)，且術(shù)后6個月實驗組再生有髓神經(jīng)纖維數(shù)量與正常對照側(cè)比較在統(tǒng)計學(xué)上無差別(p＞0.05)。 結(jié)論：1、經(jīng)后路臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植入脊髓的動物模型，經(jīng)電生理學(xué)、組織學(xué)測定及肌肉濕重恢復(fù)率測定顯示，手術(shù)入路較為簡單，神經(jīng)

7、根回植入脊髓確切，軸突再生后的再生有髓神經(jīng)纖維能夠經(jīng)再植入脊髓的神經(jīng)根向遠(yuǎn)端延伸，并產(chǎn)生肌肉濕重恢復(fù)率逐步增高的結(jié)果，為一成功的臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植入脊髓的動物模型。 2、本試驗采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備了GDNF-PLGA微囊，并采用60Co放射源對凍干微囊進(jìn)行輻照滅菌。通過對微囊特性的一系列研究測定及無菌檢查和GDNF活性測定證明微囊形態(tài)良好，含有一定濃度和活性的GDNF，并能將其緩慢釋放， 3、局部應(yīng)用GDNF