NDV對SCID鼠體內(nèi)人食管癌移植瘤生長的抑制作用研究.pdf

1、目的：2002年，我國衛(wèi)生部批準中國醫(yī)藥生物技術協(xié)會科技部負責組織臨床實施ATV-NDV（新城疫病毒修飾自體腫瘤細胞疫苗）的臨床應用研究。我國少部分省市開始了對胃癌、腸癌治療的臨床試驗，觀察到了較好的療效，但對食管癌的治療鮮有報導，因而作為ATV-NDV治療食管癌的臨床應用研究的一部分，我們課題組做了NDV（新城疫病毒）對食管癌的體內(nèi)作用研究。
　　 食管癌傳統(tǒng)的治療方法多為手術、放療、化療等，這些方法對機體產(chǎn)生創(chuàng)傷或毒副作用比

2、較明顯，患者預后較差，治療效果不佳，5年生存率低于20％。如何延長食管癌患者術后生存期，降低并發(fā)癥，提高生存質量是目前食管癌臨床治療中迫切需要解決的問題。NDV以其對腫瘤細胞的選擇性殺傷作用，同時又兼具體內(nèi)應用的高效性的特點，成為腫瘤生物治療研究的熱點。NDV抗腫瘤研究現(xiàn)已進入Ⅰ期臨床階段，但其抗腫瘤機制仍是限制其進行大規(guī)模臨床應用的主要因素。本課題組通過建立荷食管癌SCID鼠移植瘤模型，初步探討了NDV在荷食管癌SCID鼠體內(nèi)環(huán)境中誘

3、導腫瘤細胞凋亡的途徑、機制。通過檢測NDV治療后荷瘤小鼠移植瘤的各項指標，及其肝臟、腎臟、心肌等器官的功能，肯定了NDV對食管癌細胞具有選擇性殺傷作用并在治療食管癌方面具有安全性、可行性。
　　 方法：建立荷食管癌SCID鼠移植瘤模型：鈷60照射后肌肉注射環(huán)磷酰胺的方法對SCID鼠做預處理，用一次性無菌注射器抽取0.1ml的食管癌細胞懸液，注入實驗SCID鼠右腿內(nèi)側皮下，每只鼠設1個皮下接種點，約含5×106個食管癌對數(shù)生長期細

4、胞。
　　 成瘤后的SCID鼠模型進行分組：陰性對照組（生理鹽水治療）、NDV治療組(NDV治療)、陽性對照組（5-Fu治療）。對各組荷瘤鼠進行治療并觀察其體重、腫瘤體積等指標。21天后處死全部鼠：稱量裸瘤和脾臟質量，計算抑瘤率和脾臟指數(shù)，進行毒性評價；血液監(jiān)測白細胞數(shù)、肝功能、腎功能、心肌酶等指標。評價NDV治療對SCID鼠多個臟器功能的影響；對腫瘤組織、肝臟、胸腺、脾臟做病理切片，HE染色后觀察光鏡下病理變化；對NDV治療后

5、的SCID鼠腫瘤組織提取DNA進行瓊脂糖凝膠電泳實驗檢測細胞凋亡，初步探討了NDV對食管癌的體內(nèi)作用機制。
　　 結果：
　　 1.NDV組抑瘤率均為34％，陽性對照組的抑瘤率為41％。
　　 2.治療后脾臟質量和脾指數(shù)：NDV組和陰性對照組比較無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)；NDV組脾重和脾指數(shù)均高于陽性對照組，比較有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　 3.治療后SCID鼠血液白細胞數(shù)、肝功能、腎功能、心

6、肌酶等指標比較：多數(shù)指標NDV組和陰性對照組無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)；NDV組多數(shù)指標均低于陽性對照組，比較有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　 4.病理切片HE染色，光鏡觀察結果顯示：陰性對照組瘤細胞個體完整，細胞較密集，死亡區(qū)域少，范圍較小，單個細胞胞核整齊統(tǒng)一、染色清晰、核膜完整、可見核仁、細胞漿清亮、細胞質邊界明顯；NDV組腫瘤細胞死亡區(qū)域較多，有成片狀死亡、整體形態(tài)模糊，核大小不等、固縮明顯，核膜溶解、核仁消失、胞

7、漿染色不清亮，細胞質邊界不清晰，分裂相少見；陽性對照組腫瘤細胞死亡范圍大，有大量成片狀死亡區(qū)域，細胞形態(tài)相對完整，細胞核大小不均、核深染，部分細胞核膜完整，可見核仁、胞漿著色深且模糊、細胞質界限清晰。取各組荷瘤SCID鼠的肝臟組織、胸腺組織切片進行HE染色，未發(fā)現(xiàn)有明顯病理區(qū)別。
　　 5.瓊脂糖凝膠電泳顯示NDV組腫瘤組織中提取的DNA片段降解，表現(xiàn)為梯形DNA電泳條帶，說明食管癌細胞凋亡。
　　 結論：