沉默抑制信號B7-H1對樹突細胞抗原呈遞功能的影響.pdf

1、樹突細胞(DCs)是免疫系統(tǒng)中最重要的專職抗原呈遞細胞，在外周捕獲抗原后，經過處理形成MHC：抗原肽復合物并表達于細胞表面。同時，上調CD40，CD80，CD86等共刺激分子的表達，為T細胞的激活提供協(xié)同刺激信號。由于其在激活免疫反應中的重要作用，樹突細胞被廣泛應用于抗腫瘤免疫治療中。但是，在荷瘤宿主體內，腫瘤微環(huán)境及腫瘤對樹突細胞免疫耐受的誘導導致腫瘤免疫治療臨床效果不理想。所以，打破免疫耐受在抗腫瘤免疫治療中具有重要意義。許多腫瘤都

2、可以誘導樹突細胞耐受，如誘導樹突細胞表面抑制性分子B7-H1表達增加從而使機體免疫功能受到抑制。因此，我們假設通過siRNA技術沉默樹突細胞B7-H1后能夠提高以樹突細胞為基礎的抗腫瘤免疫治療的效果。 第一部分：腫瘤及腫瘤相關因素影響樹突細胞B7-H1的表達首先通過卵巢癌腫瘤細胞及腫瘤細胞上清液與骨髓來源樹突細胞共培養(yǎng)的實驗確定了腫瘤及腫瘤相關因素誘導樹突細胞免疫抑制分子表達的情況。通過半定量RT-PCR從轉錄水平及流式細胞儀從

3、蛋白表達水平觀察了腫瘤細胞及腫瘤細胞相關因素對骨髓來源的樹突細胞表面B7-H1表達的影響。結果表明，腫瘤細胞及腫瘤細胞相關因素能夠明顯上調樹突細胞B7-H1的表達。 第二部分：化學合成B7-H1siRNA沉默效果的研究利用化學合成的B7-H1siRNA轉染骨髓來源的樹突細胞，再通過半定量RT-PCR及流式細胞儀分別從轉錄水平和蛋白水平研究B7-H1siRNA對樹突細胞B7-H1表達的沉默效果。結果顯示利用化學合成的B7-H1si

4、RNA可以有效沉默樹突細胞B7-H1的表達。 第三部分：沉默B7-H1的樹突細胞負載腫瘤特異性抗原肽(TRP2)后在抗腫瘤免疫治療中的作用實驗首先建立了以黑色素瘤為基礎的腫瘤免疫治療小鼠模型。然后利用B7-H1沉默的樹突細胞負載TRP2抗原肽免疫小鼠，觀察沉默B7-H1的樹突細胞的抗腫瘤免疫效應。并通過流式細胞儀檢測小鼠脾臟內Gr1<'+>CD11b<'+>細胞和Treg細胞(T調節(jié)細胞)的變化情況來研究免疫抑制的機制。結果顯示

5、以。B7-H1沉默的樹突細胞為基礎的腫瘤免疫治療能夠有效抑制腫瘤細胞的生長，并且導致宿主體內Gr1<'+>CD11b<'+>細胞和Treg細胞的減少。綜上，我們得出：1)1D8卵巢癌細胞能夠上調樹突細胞B7-H1的表達；2)化學合成的B7-H1siRNA能夠有效降低B7-H1mRNA水平和細胞表面：B7-H1的表達水平；3)沉默樹突細胞B7-H1能夠明顯提高以樹突細胞為基礎的抗腫瘤免疫治療的療效；4)實驗組中Gr1<'+>CD11b<'

6、+>髓系抑制細胞及CD4<'+>CD25<'+>Treg細胞的減少，表明荷瘤宿主體內Gr1<'+>CD11b<'+>髓系抑制細胞和CD4<'+>CD25<'+>Treg細胞的產生依賴于B7-H1的信號傳遞途徑。所以，B7-H1導致的免疫抑制可能在腫瘤進展和腫瘤引起的樹突細胞耐受中起重要作用。 通過siRNA技術沉默樹突細胞B7-H1的表達能夠降低免疫抑制水平并且控制腫瘤的生長。雖然只在動物模型和黑色素細胞瘤模型中取得了初步效果，