毛囊干細(xì)胞與異種膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)生物相容性研究.pdf

1、目的：通過構(gòu)建毛囊干細(xì)胞(Hair follicle stem cells，HFSCs)與異種膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)(bladder acellular matrix, BAM)為支架的細(xì)胞支架復(fù)合物，觀察細(xì)胞支架復(fù)合物的體外生物相容性，為HFSCs和異種BAM復(fù)合物修復(fù)膀胱缺損的研究提供前期的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：聯(lián)合應(yīng)用顯微分離法、二步酶法及差速貼壁法獲取大鼠HFSCs，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)特征，表面標(biāo)志物CK15、β1整合素及C

2、D34聯(lián)合用于鑒定；制備新西蘭兔BAM，通過掃描電鏡和Masson染色檢測(cè)材料脫細(xì)胞效果，采用二次沉淀法將P3代HFSCs靜態(tài)接種于BAM表面，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，組織學(xué)檢測(cè)和掃描電鏡觀察細(xì)胞在材料表面的生長(zhǎng)狀況。
　　結(jié)果：純化的HFSCs集落呈典型的“鋪路石狀”，CK15角質(zhì)蛋白抗體免疫熒光染色呈陽性表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)PE標(biāo)記的CD34呈較高表達(dá)，F(xiàn)ITC標(biāo)記的β1整合素成高表達(dá)。制備的BAM為

3、白色半透明膜狀,掃描電鏡下觀察為纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),未見細(xì)胞殘留。Masson染色提示BAM為膠原結(jié)構(gòu)，無明顯細(xì)胞殘留，細(xì)胞毒性檢測(cè)表明材料無細(xì)胞毒性。細(xì)胞材料體外復(fù)合培養(yǎng)48h后倒置顯微鏡下觀察BAM周圍HFSCs生長(zhǎng)狀態(tài)良好，HFSCs-BAM材料上細(xì)胞生長(zhǎng)曲線與對(duì)照組類似，7-8天左右進(jìn)入生長(zhǎng)平臺(tái)期，掃描電鏡下觀察HFSCs伸展、粘附于BAM支架表面。體外復(fù)合培養(yǎng)1周行組織學(xué)檢測(cè)，可見1～3層細(xì)胞鋪于支架材料表面。
　　結(jié)論：HF