新型納米纖維支架細(xì)胞生物相容性研究.pdf

1、組織工程支架已經(jīng)廣泛用于先天性及獲得性心血管疾病的的外科手術(shù)治療。目前，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)病率呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢，仍以冠狀動(dòng)脈搭橋移植術(shù)作為主要治療手段。手術(shù)中主要用自體靜脈和（或）動(dòng)脈血管作為移植物。但有些患者由于沒有適合移植的自體血管，導(dǎo)致血管移植管道來源受限。先天性心臟病是常見的心臟疾病，許多疾病如法洛氏四聯(lián)癥，主動(dòng)脈縮窄，室間隔缺損，房間隔缺損等疾病的手術(shù)矯治常需要補(bǔ)片來重構(gòu)狹窄、修補(bǔ)缺損部分。自體心包補(bǔ)片術(shù)后愈合過

2、程中，由于纖維素沉積和結(jié)締組織均質(zhì)樣變化，心包補(bǔ)片內(nèi)皮化，尤其補(bǔ)片纖維化，容易造成術(shù)后再狹窄。傳統(tǒng)人工合成材料補(bǔ)片因術(shù)后免疫排斥反應(yīng)、吻合口增生、血栓形成，且不能隨兒童生長管腔相應(yīng)增大，及長期存于體內(nèi)，遠(yuǎn)期通暢率降低，潛在感染可能等問題，影響預(yù)期臨床治療效果，限制其在臨床的應(yīng)用。因此，具有組織再生潛能的組織工程高分子生物支架的出現(xiàn)頗有意義，它可替代自體補(bǔ)片用于心血管外科手術(shù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)中采用體外原代及傳代培養(yǎng)兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)

3、胞并比較兔主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞在傳統(tǒng)支架和高孔隙率納米纖維支架的生長情況，通過細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞粘附率、增殖力研究評估支架的細(xì)胞相容性。為制備新型心血管修補(bǔ)支架提供理論依據(jù)。
　　 第一部分 兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的分離、培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：為新型納米纖維支架細(xì)胞生物相容性研究實(shí)驗(yàn)提供種子細(xì)胞。
　　 方法：將兔麻醉后迅速取出主動(dòng)脈，無菌條件下采用組織貼塊法培養(yǎng)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞并進(jìn)行傳代，培養(yǎng)中應(yīng)用倒置顯微鏡、掃描

4、電鏡、透射電鏡進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)觀察、免疫組化鑒定細(xì)胞類型。
　　 結(jié)果：成功培養(yǎng)出兔血管平滑肌細(xì)胞并進(jìn)行了傳代。在培養(yǎng)過程中可見倒置顯微鏡下的“峰－谷”樣生長特征、透射電鏡下胞漿內(nèi)肌絲及免疫組化胞漿中肌動(dòng)蛋白抗體（＋）的觀察結(jié)果，可證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞為兔主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞。
　　 結(jié)論：本次實(shí)驗(yàn)成功培養(yǎng)出兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，可為下一步新型納米纖維支架細(xì)胞生物相容性研究實(shí)驗(yàn)提供合格的種子細(xì)胞。
　　 第二部分 新

5、型納米纖維支架細(xì)胞生物相容性實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：研究高孔隙率聚己內(nèi)酯（polycaprolactone,PCL）靜電紡絲納米纖維支架的細(xì)胞生物相容性。將培養(yǎng)的3-6代兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)用種子細(xì)胞。將種子細(xì)胞接種于預(yù)處理的支架上，進(jìn)行培養(yǎng)。一定時(shí)間間隔應(yīng)用WST-1(water-soluble tetrazolium,WST)法測定平滑肌細(xì)胞粘附率、增殖力，光鏡及掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、生長、增殖狀況，評估支架的細(xì)胞生物相

6、容性。
　　 方法：應(yīng)用WST-1(water-soluble tetrazolium,WST)法測定平滑肌細(xì)胞粘附率、增殖力，光鏡及掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，評估支架的細(xì)胞生物相容性。
　　 結(jié)果：新型高孔隙率PCL納米纖維支架對生長于支架表面的種子細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)無明顯影響；種植于新型支架上的種子細(xì)胞粘附率較傳統(tǒng)支架種子細(xì)胞粘附率明顯增高，差異具有顯著性（P＜0.05）；新型支架上的種子細(xì)胞增殖能力較傳統(tǒng)支架上種子細(xì)胞增殖

7、能力明顯增高，差異具有顯著性（P＜0.05）；新型支架材料上的種子細(xì)胞代謝活性情況與空白對照組無明顯差異，較傳統(tǒng)支架組代謝活性較好，差異具有明顯顯著性（P＜0.05）。新型支架上的種子細(xì)胞細(xì)胞鋪展及生長、增殖狀況較傳統(tǒng)支架材料上的種子細(xì)胞有明顯優(yōu)勢、細(xì)胞生長速度較快。
　　 結(jié)論：靜電紡絲技術(shù)制備的新型納米纖維支架為高孔隙率納米纖維支架，其具有的多級孔徑小于平滑肌細(xì)胞的直徑大小，有利于平滑肌細(xì)胞的粘附、增殖。利于粘附蛋白的粘附、