夏枯草提取物對A549細胞蛋白質(zhì)組影響的研究.pdf

1、目的：
　　肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病呈年輕化趨勢。由于抗腫瘤藥物毒副作用大、易產(chǎn)生耐藥性，影響了在臨床上的應用。夏枯草(Prunella vulgaris L.)為唇形科夏枯草屬植物的干燥果穗，是一味傳統(tǒng)抗腫瘤中藥，其抗腫瘤作用是一個涉及多成分、多靶點、多途徑的過程，調(diào)節(jié)這些過程的本質(zhì)是基因，而最直接的作用者是蛋白質(zhì)。本實驗運用雙向電泳技術和蛋白質(zhì)譜技術，分析肺腺癌A549細胞和夏枯草作用后A549細胞蛋白質(zhì)表達量或質(zhì)的

2、變化，從蛋白質(zhì)組學水平探討夏枯草抗肺腺癌的作用機制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)肺腺癌A549細胞，將其分成二組:正常對照組（不加夏枯草提取物）、實驗組（夏枯草提取物用藥組）。采用MTT比色法檢測不同濃度夏枯草提取物對腺癌A549細胞增殖抑制作用，找到最佳夏枯草提取物作用濃度。加入此濃度夏枯草提取物檢測不同作用時間下對肺腺癌A549細胞增殖活力的影響，找到最佳作用時間。以超聲裂解細胞法分別提取兩組細胞總蛋白，進行蛋白質(zhì)雙向電泳

3、分離和凝膠硝酸銀染色，進行3次重復測定。經(jīng)UMAX ImageScanner凝膠掃描儀及LabScan軟件進行圖象掃描、Image Master2D Platinum6.0軟件對獲得的蛋白圖譜加以分析，尋找差異表達蛋白質(zhì)。切取差異蛋白表達點，經(jīng)膠內(nèi)酶解后，進行基質(zhì)輔助激光電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)分析獲得肽指紋圖譜，用MASCOT軟件(Matrix Science Ltd.)進行數(shù)據(jù)庫搜索，得到差異蛋白質(zhì)信息。

4、　　結(jié)果：
　　夏枯草提取物可明顯抑制肺腺癌A549細胞的生長，且具有一定的量效關系。采用雙向電泳技術建立正常對照組及夏枯草提取物作用后肺腺癌A549細胞蛋白質(zhì)組圖譜，結(jié)果顯示:正常對照組3塊凝膠的平均蛋白質(zhì)點為1585個，加藥組3塊凝膠的平均蛋白質(zhì)點為2108個。選取所有膠上分辨清楚且組內(nèi)3炔膠中均出現(xiàn)的蛋白質(zhì)點進行兩組間差異分析，共篩選出具有明顯差異的蛋白質(zhì)點40個，其中3倍以上差異點18個，有和無差異點3個。經(jīng)過膠內(nèi)酶切后用

5、MALDI-TOF-MS進行檢測，得到如下結(jié)果:
　　1、在實驗組中表達上調(diào)的蛋白有:Type1 inositol1，4，5-trisphosphatereceptor、Heat shock cognate protein70、Tumor protein p53、T-cell receptordetla chain、Tropomyosin2(beta) isoform1和Cyclin B3;
　　2、在實驗組中表達下調(diào)的蛋白

6、有: Enolase1、M2-type pyruvate kinase和Heat shock protein27。
　　結(jié)論：
　　夏枯草提取物通過“多靶點、多途徑”發(fā)揮抗肺腺癌A549細胞的作用，具體機制可能是:
　　1、通過調(diào)節(jié)烯醇化酶-1、腫瘤2型丙酮酸激酶，干擾肺腺癌A549細胞內(nèi)能量代謝，降低細胞糖酵解和磷酸化能力，抑制細胞生長。
　　2、通過調(diào)節(jié)細胞周期蛋白B3的表達影響肺腺癌A549細胞周期，阻滯細