硫酸吲哚酚誘導臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷及α-硫辛酸的干預作用.pdf

1、背景:內(nèi)皮細胞功能障礙和氧化應激是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的主要機制，慢性腎臟病(Chronic renal disease CKD)患者體內(nèi)尿毒癥毒素堆積是并發(fā)心血管疾病的高風險因素;其中蛋白結合型尿毒癥毒素硫酸吲哚酚(Indoxyl Sulfate IS)能產(chǎn)生促氧化的作用，誘導血管內(nèi)皮功能障礙，促進心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，近年來抗氧化劑改善內(nèi)皮細胞功能障礙的研究備受關注。
　　目的:以人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical

2、 vein endothelial cellsHUVEC)為實驗模型，探討抗氧化劑硫辛酸(alpha-lipoic acid LA)是能否干預尿毒癥毒素硫酸吲哚酚(IS)誘導的氧化應激和血管內(nèi)皮細胞損傷并初步探討其作用機制。
　　方法:對人臍靜脈內(nèi)皮傳代細胞進行體外培養(yǎng)，將其分成正常對照組、硫酸吲哚酚(IS)組、硫辛酸(LA)組及硫酸吲哚酚和硫辛酸聯(lián)合組（簡稱LA+IS組）;通過ELISA法測定細胞內(nèi)3-硝基酪氨酸(3-Nitro

3、-L-tyrosine3-NT)的含量，黃嘌呤氧化酶法測定細胞超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase SOD)活性，比色法測還原性谷胱甘肽(Glutathione GSH)的含量，硝酸還原酶法測量細胞培養(yǎng)液中一氧化氮(Nitric oxide NO)的含量及比色法測一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase NOS)活性，通過RT-PCR及熒光定量PCR技術分析內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(Endothelial

4、 nitric oxidesynthase eNOS)的表達。
　　統(tǒng)計學處理采用 SPSS17.0軟件，結果用均數(shù)±標準差表示。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)，均數(shù)兩兩比較采用Bonferroni法檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。各組實驗至少重復4次。
　　結果:
　　1、血管內(nèi)皮細胞氧化應激指標
　　①測定培養(yǎng)液GSH含量，與正常對照組（78.426±2.543mg/l）相比，IS組（54.

5、683±3.408mg/l）GSH水平明顯降低（P＜0.001），LA組(89.754±2.938 mg/l)較之升高(P＜0.001)，使用LA干預后的IS+LA組(81.348±3.254mg/l)較IS組(54.683±3.408mg/l)GSH升高(P＜0.001)。
　?、谙啾葘φ战MSOD活性(18.186±2.106U/mgprot)， IS組(12.984±1.413 U/mgprot)明顯降低(P＜0.001)，使

6、用LA干預后(20.390±1.124 U/mgprot)活性升高(P＜0.001)，而使用IS+LA同時干預后(16.806±1.237U/mgprot)較IS組(12.984±1.413 U/mgprot)SOD升高(P＜0.001)。
　　2、內(nèi)皮細胞NO相關指標
　?、倥c對照組NO(48.235±2.508umol/l)相比，IS組(35.618±3.843umol/l)顯著性降低(P＜0.001);LA組(52.3

7、29±2.935umol/l)和IS+LA組(42.565±3.273umol/l)較IS組（35.618±3.843umol/l）NO升高(P＜0.001)。
　　②NOS活性IS組(0.835±0.057U/L)較對照組(0.967±0.032U/L)相比，顯著性降低(P＜0.001)，LA組(1.054±0.083 U/L)較之明顯升高(P＜0.001)，IS+LA組(0.902±0.064U/L)較IS組(0.835±0.

8、057U/L)NOS活性升高(P＜0.05)。
　?、塾肊LISA法測定勻漿中3-NT含量，與對照組(38.175±5.403nmol/l)相比，IS組(47.665±4.934nmol/l)產(chǎn)生3-NT含量明顯增加(P＜0.001)，LA組(30.473±3.496nmol/l)較之水平下降（P＜0.001），而IS+LA組（35.661±4.726nmol/l）較IS組(47.665±4.934nmol/l)產(chǎn)生3-NT的水平

9、明顯下降(P＜0.001)。
　　④RT-PCR檢測結果提示:eNOS表達與對照組(1.091±0.064)相比，IS組(1.054±0.092)呈現(xiàn)表達下調(diào)（P＜0.05），而用LA處理后，LA組(1.287±0.113)明顯上調(diào)（P＜0.05），IS+LA組（1.096±0.073）eNOS的表達水平也比較高（P＜0.05）。
　　結論:
　　1、硫酸吲哚酚可誘導內(nèi)皮細胞氧化應激
　　2、α-硫辛酸可能通過糾