EPA對白蛋白誘導(dǎo)腎小管上皮細胞損傷的保護作用的機制研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　在各種慢性腎臟病進展中，腎臟纖維化是其共同的病理基礎(chǔ)，也是導(dǎo)致終末期腎病的主要原因。腎臟纖維化的病理改變主要包括腎小球硬化和小管間質(zhì)纖維化。腎小管上皮細胞(human proximal tubular cells，HK-2)損傷并分泌大量致炎因子、促纖維形成因子和基質(zhì)蛋白等，形成小管間質(zhì)損傷的惡性循環(huán)，是引起腎間質(zhì)纖維化的主要原因。整合素連接激酶(integrin-linked kinase，ILK)、整合素

2、β1(integrin β1)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferators-activated receptor gamma,PPARγ）等與腎臟纖維化的進展有著十分密切的關(guān)系。多不飽和脂肪酸(polyunsaturated Fatty Acids，PUFA)是哺乳動物體內(nèi)的必需脂肪酸。但是其體內(nèi)不能自身合成PUFA，只能從食物中攝取。食品來源的多不飽和脂肪酸有Ω-3(n-3PUFA和Ω-6(n-6)

3、PUFA兩種類型。從深海魚類中提取的魚油，含豐富的n-3PUFA，二十二碳五烯酸(eicosapentaenoic acid，EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)是其主要活性成分。研究發(fā)現(xiàn)魚油除具有如抗血栓、調(diào)血脂等作用外，還對腎臟有一定的保護作用，延緩腎臟疾病的進展。
　　本實驗通過白蛋白致腎小管上皮細胞損傷模型觀察EPA對HK-2ILK、整合素β1、PPARγ表達的影響，探究EPA對腎臟

4、的保護作用機制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　取對數(shù)生長期HK-2，常規(guī)培養(yǎng)24h后，換無血清培養(yǎng)24h，使細胞同步于G0期。分為:正常對照組;白蛋白組（模型組，白蛋白20.0mg/L）;EPA干預(yù)組（白蛋白20.0mg/L+EPA10μmol/L或100μmol/L）。各組分別培養(yǎng)24h、48h，72h后，進行指標測定。
　　1、采用Western Blot法觀察EPA對白蛋白刺激HK-2PPARγ、IL

5、K和整合素β1表達的影響;
　　2、采用RT-PCR法觀察EPA對白蛋白刺激HK-2PPARγ、ILK和整合素β1mRNA表達的影響。
　　結(jié)果：
　　1.EPA對白蛋白刺激HK-2細胞PPARγ表達的影響
　　白蛋白可使HK-2細胞PPARγmRNA和蛋白表達下降;EPA可增加白蛋白誘導(dǎo)的HK-2細胞PPARγmRNA和蛋白的表達。
　　2.EPA對白蛋白刺激HK-2細胞ILK表達的影響
　　白蛋白

6、可增加HK-2細胞ILKmRNA和蛋白的表達;EPA可使白蛋白誘導(dǎo)的HK-2細胞ILKmRNA和蛋白表達下降。
　　3.EPA對白蛋白刺激HK-2細胞整合素β1mRNA表達的影響
　　白蛋白可使HK-2細胞整合素β1mRNA的表達下降;EPA可增加白蛋白誘導(dǎo)的HK-2細胞整合素β1mRNA表達。
　　結(jié)論：
　　1.EPA能夠促進白蛋白誘導(dǎo)的HK-2細胞PPARγ蛋白和基因的表達。
　　2.EPA可以抑制白