bFGF在煙草煙霧誘導大鼠血管平滑肌細胞增殖中的作用.pdf

1、吸煙是動脈粥樣硬化的主要危險因素，對于人類在心血管方面的危害超過了吸煙導致的肺癌。我國是世界上煙草消耗最大的國家，國人60％男性和3％女性吸煙，吸煙者大約有3.5億人。吸煙對人類健康的危害是巨大的，2000年世界上有169萬人因吸煙死于心血管疾病，占全球心血管疾病死亡人數(shù)的11％，2002年有500萬人的死亡是由吸煙引起的，而我國每年有120萬人因吸煙導致死亡。
　　 堿性成纖維細胞生長因子（basic Fibroblast G

2、rowth Factor，bFGF）是肝素結(jié)合生長因子家族成員之一，在體內(nèi)分布廣泛。bFGF具有多種生物學特性，促進細胞增殖是其主要作用之一。而血管平滑肌細胞增殖（vascular smooth muscle cell，VSMC）是動脈粥樣硬化、再狹窄和肺動脈高壓等多種心血管疾病的病理基礎。
　　 本研究應用煙草煙霧提取物（cigarette smoke extract，CSE）刺激體外培養(yǎng)的大鼠VSMC，觀察其對大鼠VSMC增

3、殖的影響并應用bFGF抗體中和bFGF生物功能，探討bFGF在CSE刺激VSMC增殖中的作用機制。
　　 實驗方法：
　　 一、大鼠主動脈血管平滑肌細胞培養(yǎng)
　　 細胞在37℃、5％CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，每2天換液1次。當細胞長滿瓶底80％左右時，用0.25％胰蛋白酶消化傳代。取第3～8代的細胞，當細胞長至70％～80％融合時進行實驗。
　　 二、實驗分組
　　 1、用不同濃度（0，2.5％

4、，5％，10％，20％）CSE刺激VSMC，采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法（MTT法）觀察細胞增殖變化，免疫細胞化學法測定bFGF和增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）蛋白的表達，同時用RT-PCR檢測bFGF mRNA表達。
　　 2、用篩選出的最適CSE濃度處理VSMC不同時間（0h，4h，8h，12h，24h）后，檢測bFGF mRNA，bFGF和PCNA蛋白

5、的變化。
　　 3、用bFGF抗體和最適濃度CSE干預VSMC 24h后檢測細胞增殖，bFGF和PCNA蛋白表達的變化。
　　 三、實驗檢測方法
　　 噻唑藍[3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT]比色法測定VSMC的增殖；用免疫細胞化學法測定bFGF、PCNA蛋白的表達；用RT-PCR檢測bFGF mRNA表達的變化。

6、
　　 實驗結(jié)果：
　　 1、與對照組相比，低濃度（2.5％）CSE組（P<0.05）和中濃度（5％）CSE組增加明顯P<0.01），而高濃度（10％CSE）或過高濃度（20％CSE）組與對照組相比差異無顯著性（P>0.05）。bFGF mRNA、蛋白和PCNA蛋白在對照組中有少量表達。與對照組相比，2.5％CSE組表達增加（P<0.01），5％CSE組達到高峰。10％、20％CSE組仍高于對照組（P<0.01）。

7、>　　 2、對照組（不加CSE組即0h組）VSMC中有少量bFGF mRNA、蛋白和PCNA蛋白表達。5％CSE刺激4h后細胞內(nèi)bFGF mRNA、蛋白和PCNA蛋白表達增加（P<0.01），bFGF mRNA于8h達高峰；bFGF和PCNA蛋白于12h達高峰。
　　 3、bFGF抗體可顯著抑制5％CSE誘導的MTT吸光度（A值）和bFGF、PCNA蛋白表達增加。
　　 結(jié)論：
　　 CSE可能是通過增加bFG