一條肺癌耐藥相關新基因LCCSG的全長克隆與功能初步鑒定.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文一條肺癌耐藥相關新基因LCCSG的全長克隆與功能初步鑒定姓名：陳永鋒申請學位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學（呼吸系?。┲笇Ы處煟簵詈推?0091101第三軍醫(yī)大學博士學位論文8步探討該基因與肺癌MDR的關系，為進一步研究該基因的生物學功能以期尋找新的逆轉耐藥途徑提供基礎。方法1.以已知的466bp為模板，應用cDNA末端快速擴增（rapidamplificationofcDNAends，RACE）技術獲取該新基因的全長克

2、隆，利用生物信息學技術進行新基因的染色體定位與二級結構的預測，并登錄GenBank（locusFJ159850）將該新基因命名為LCCSG基因。2.采用半定量RTPCR檢測LCCSGmRNA在非小細胞肺癌及其他多種組織、細胞系中的表達分布情況。3.構建反義表達載體人pAdEasyLCCSG重組腺病毒，感染NCIH446CDDP細胞后，觀察LCCSGmRNA表達抑制程度；觀察抑制LCCSG表達后NCIH446CDDP對多種化療藥物耐藥性的

3、變化，以及對多個多藥耐藥相關基因（MRP1、GST、TopoαⅡ、MDR1）mRNA及蛋白表達的影響，初步探討其耐藥機制。結果結果1獲取了該新基因的955bp的cDNA全長序列，通過與互聯(lián)網(wǎng)上人類基因組序列的比對，其中920bp完全一致，初步驗證了RACE結果的可靠性。2采用半定量RTPCR的方法檢測LCCSGmRNA在多種組織、細胞系中的表達結果顯示：⑴LCCSG在非小細胞肺癌的癌組織、癌旁組織及正常組織中均有表達，并且各組之間無明顯

4、表達差異；LCCSG的表達與非小細胞肺癌的病理類型、分化程度和TNM分期無相關性。⑵LCCSG在食道癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌和腎透明細胞癌的癌組織、癌旁組織及正常組織中也均有表達，并且各組之間無明顯表達差異。⑶LCCSG在耐藥細胞NCIA549CDDP、NCIH446CDDP中的表達均顯著強于其親代細胞（p0.01）。3.應用AdEasy復制缺陷型腺病毒載體系統(tǒng)構建人LCCSG反義重組腺病毒，感染耐藥細胞NCIH4