吉非替尼聯(lián)合培美曲塞克服非小細(xì)胞肺癌EGFR-TKI獲得性耐藥的體外研究.pdf

1、目的:當(dāng)前化療和靶向治療都由于耐藥問(wèn)題的出現(xiàn)而阻礙了其臨床療效的延續(xù)。然而,化療聯(lián)合表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸酶抑制劑(EGFR-TKI)被推薦作為一種策略用于克服非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者 EGFR-TKI獲得性耐藥。本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討靶向藥物吉非替尼聯(lián)合化療藥物培美曲塞作用于 EGFR-TKIs獲得性耐藥的NSCLC細(xì)胞株P(guān)C9/GR的抗腫瘤效應(yīng),并探討其可能機(jī)制。
　　方法:吉非替尼和培美曲塞單藥以及聯(lián)合給藥作用于 NS

2、CLC吉非替尼獲得性耐藥PC9/GR細(xì)胞株。MTT法檢測(cè)不同濃度的吉非替尼和培美曲塞對(duì)PC9/GR細(xì)胞株的增殖抑制作用,并分別計(jì)算出兩單藥對(duì) PC9/GR細(xì)胞株的半數(shù)抑制率(IC50)及兩藥聯(lián)合作用于PC9/GR細(xì)胞的聯(lián)合指數(shù)(CI)。Annexin V-FITC熒光染色法觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化;流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)不同藥物處理組對(duì)PC9/GR細(xì)胞株細(xì)胞周期及凋亡率的影響。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)不同藥物處理組對(duì) PC9/GR細(xì)胞中 p-AKT及

3、Bcl-2蛋白水平的影響。
　　結(jié)果:吉非替尼和培美曲塞作用于PC9/GR細(xì)胞72 h的IC50分別為(4.94±0.44)μmol/L和(0.51±0.023)μmol/L,兩藥均呈劑量依賴(lài)性的增殖抑制作用,且兩藥聯(lián)合時(shí)表現(xiàn)出明顯的協(xié)同效應(yīng)(CI<1)。細(xì)胞周期分析顯示吉非替尼將PC9/GR細(xì)胞阻滯于G0/G1期;而培美曲塞將細(xì)胞阻滯于S期;培美曲塞聯(lián)合吉非替尼使得G0/G1期細(xì)胞比例降低,而使相應(yīng)的S期細(xì)胞比例增多(P<0.0

4、1)。經(jīng)Annexin V-FITC染色的各組細(xì)胞在熒光顯微鏡下顯示兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,處于凋亡晚期的細(xì)胞較其他處理組明顯增多,可見(jiàn)細(xì)胞核固縮、碎裂。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥組的細(xì)胞凋亡率高于陰性對(duì)照組及單獨(dú)用藥組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在檢測(cè)蛋白表達(dá)過(guò)程中,我們發(fā)現(xiàn)培美曲塞能上調(diào)p-AKT的表達(dá)水平;吉非替尼聯(lián)合培美曲塞處理組的p-AKT及Bcl-2較對(duì)照組明顯下降。
　　結(jié)論:本研究通