Nrf2-ARE信號通路與2型糖尿病心肌病發(fā)病機制的相關研究.pdf

1、目的:本研究旨在使用Wistar大鼠建立糖尿病心肌病模型，觀察建模成功后心肌細胞超微結構變化，凋亡及心肌纖維化，氧化應激等相關指標及Nrf2的表達，觀察給予Nrf2/ARE信號通路激活劑CPDT后HO-1、MDA、Nrf2表達的變化。通過研究Nrf2/ARE信號通路表達與上述指標變化的關系，探討Nrf2/ARE信號通路在糖尿病心肌病發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:1.建立Wistar大鼠2型糖尿病心肌病模型。將雄性Wistar大鼠3

2、0只隨機分成正常對照組(Normal control，正常組)10只、高糖高脂飼料喂養(yǎng)組20只。喂養(yǎng)4周后大鼠禁食10-12小時，測空腹血糖。第6周腹腔注射30mg/kg鏈脲佐霉素(streptozotocin STZ)1次，建立2型糖尿病心肌病大鼠模型。1周后測空腹血糖≥16.7mmol/L認為模型建立成功。將造模成功大鼠分為2組:糖尿病心肌病組、干預組(Ⅱ相酶誘導劑CPDT500umol/kg/d)。持續(xù)喂以高糖高脂飼料，CPDT持

3、續(xù)給藥14天，結束實驗。2、心臟采血測定空腹血糖。3、心臟采血后迅速取出心臟，用等滲鹽水洗凈，濾紙吸干，稱心臟重量，計算左心室重量指數。4、HE染色:取左心室游離壁組織，常規(guī)固定，石蠟包埋，觀察心肌細胞大小及心肌纖維化情況。5、透射電鏡觀察心肌超微結構的變化。6、TUNEL法檢測心肌細胞凋亡指數。7、Western blot法檢測心肌組織HO-1、MDA，Nrf2表達。8、統(tǒng)計學處理:應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，數據以均數±標

4、準差((x)±s)表示，組間比較采用獨立樣本均數t檢驗，相關指標之間采用直線相關分析，檢驗水準α=0.05，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。
　　結果:1、大鼠一般情況指標:(1)血糖:糖尿病組與干預組較正常組血糖升高(P＜0.01)。(2)體重:糖尿病組與干預組較正常組體重明顯減輕(P＜0.01)。(3)心體比及左心室重量指數:糖尿病組較正常組心體比及左心室重量指數增加(P＜0.01)，干預劑組較糖尿病組減少(P＜0.01)。2、

5、HE染色:糖尿病組與干預組較正常組心肌細胞體積增大(P＜0.01)。3、TUNEL:糖尿病組比正常組心肌細胞凋亡指數增加(P＜0.01)，干預劑組比糖尿病組心肌細胞凋亡指數減少(P＜0.01)。4、電鏡:正常組心肌細胞形態(tài)正常，肌絲豐富、排列緊密，線粒體形態(tài)正常;糖尿病組心肌細胞肥大，心肌稀疏，部分有斷裂甚至溶解，線粒體腫脹。5、Western blot:糖尿病組較正常組HO-1表達減低(P＜0.01)，干預組較糖尿病組表達升高(P＜0