小膠質細胞在錳誘導的大鼠黑質多巴胺能神經元損傷中作用的初步研究.pdf

1、錳是一種機體必需微量元素，但過多的錳進入體內則會產生毒性作用。 錳中毒主要產生錐體外系損傷，癥狀與帕金森病類似，其主要病理進程是選擇性的多巴胺能神經元的退行性變性，導致紋狀體多巴胺的耗竭，但錳的神經毒性機制目前研究的并不清楚。 以往對錳神經毒性的研究多關注錳對神經元尤其是多巴胺能神經元的直接損傷，而中樞神經系統(tǒng)中占絕大多數的神經膠質細胞在錳引起的神經毒性中的作用卻一直被忽視。小膠質細胞作為中樞神經系統(tǒng)的免疫反應細胞，監(jiān)控

2、著腦內的微環(huán)境。它最顯著的特點是對外界環(huán)境刺激非常敏感，在微環(huán)境發(fā)生變化時，小膠質細胞可迅速做出反應，由靜息狀態(tài)被激活。處于活化狀態(tài)的小膠質細胞對神經元有保護作用，但是過度活化的小膠質細胞會產生嚴重的神經毒性作用，它所產生的活化產物，如誘導型一氧化氮合酶、腫瘤壞死因子α和白介素1-β等，被認為在介導神經元的損傷中起著非常重要的作用。 近來研究發(fā)現，錳可使活化的N9 或BV2 小膠質細胞表達大量致炎因子和誘導型一氧化氮合酶。因此本

3、研究旨在通過錳中毒的動物模型，在體內探討小膠質細胞在錳誘導的神經毒性中的作用以及可能機制，為進一步闡明錳的神經毒性作用提供了依據。 目的： 通過腦內注射錳，建立錳中毒的動物模型，觀察錳是否可以引起大鼠黑質小膠質細胞活化和多巴胺能神經元的損傷，并進一步探討小膠質細胞在錳誘導的大鼠黑質多巴胺能神經元損傷中的作用及可能機制。 方法： ①使用腦立體定位注射方法建立錳中毒的動物模型； ②分別采用免疫熒光染色

4、和免疫組織化學染色觀察小膠質細胞的活化狀況和多巴胺能神經元的損傷情況； ③RT-PCR 檢測誘導型一氧化氮合酶和腫瘤壞死因子α mRNA 的表達；免疫組織化學染色檢測誘導型一氧化氮合酶的表達；ELISA試劑盒檢測腫瘤壞死因子α、白介素1-β的含量。 結果： ①通過腦立體定位注射方法成功建立了大鼠錳中毒的動物模型； ②免疫熒光染色檢測小膠質細胞的活化程度，靜止狀態(tài)的小膠質細胞胞體較小，突起較長；活化

5、狀態(tài)的小膠質細胞胞體變大，突起變短。錳處理后1d，部分小膠質細胞開始活化，與對照組相比胞體變大，突起增粗。錳處理后7d，活化狀態(tài)的小膠質細胞數量與對照組相比明顯增多，提示單獨錳可以誘導小膠質細胞活化。處理后1d 和7d，對照組均未觀察到活化狀態(tài)的小膠質細胞； ③免疫組織化學染色檢測結果表明，錳處理后1d，大鼠黑質TH 免疫反應陽性細胞數與對照組相比，無明顯變化；錳處理后7d ，大鼠黑質TH 免疫反應陽性細胞數與對照組相比明顯減少

6、； ④RT -PCR 檢測結果顯示錳作用后，黑質和紋狀體的腫瘤壞死因子α和誘導型一氧化氮合酶mRNA 表達水平與對照組相比均顯著升高；免疫組織化學染色和ELISA 檢測結果顯示染錳組黑質和紋狀體誘導型一氧化氮合酶、腫瘤壞死因子α和白介素1-β蛋白表達水平與對照組相比也顯著升高； ⑤使用小膠質細胞活化抑制劑米諾環(huán)素后，小膠質細胞的活化程度明顯低于染錳組；小膠質細胞活化產物，誘導型一氧化氮合酶、腫瘤壞死因子α和白介素1-β表