中國人群中ADNFLE患者的CHRNA4突變及多態(tài)性研究.pdf

1、常染色體顯性遺傳夜間發(fā)作性額葉癲癇(autosomal dominant noctumal frontal lobe epilepsy，ADNFLE)是一種常染色體顯性單基因遺傳病，通常兒童期起病，可持續(xù)于成年期，發(fā)作與睡眠關系密切，其特點為夜發(fā)性、叢集性、短暫性運動性癲癇，常被誤診為睡眠障礙。ADNFLE一般依據(jù)臨床特點診斷，輔助檢查缺乏特異性指標，發(fā)作間期腦電圖異常較為少見，頭顱CT、MRI也未發(fā)現(xiàn)特征性的腦結構異常。正是由于缺乏特

2、異性診斷指標，給診斷和鑒別診斷帶來較大困難，且頻繁的夜間發(fā)作，嚴重地威脅患兒的健康和生命安全。究其原因主要為ADNFLE的發(fā)病機制尚未完全闡明。雖然近年來有學者通過對ADNFLE家系的研究在位于染色體20q、1q的編碼神經(jīng)元煙堿乙酰膽堿受體(nAChR)亞基(分別為α4和β2)的兩個基因(CHRNA4和CHRNB2)上發(fā)現(xiàn)異常，但存在一定的種族差異，且中國ADNFLE患者的基因異常尚未被發(fā)現(xiàn)。nAChR是一種離子通道受體，由α、β、γ、

3、6等4種異質亞基組成的五聚體，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的nAChR主要為α2β4型。雖然已報道ADNFLE與CHRNA4和CHRNB2兩種基因突變有關，但至今研究較多且與ADNFLE關系較明確的致病基因仍為定位于20q13.2的CHRNA4基因。 有鑒于此，我們假設中國ADNFLE患者亦可能存在CHRNA4的異常。這種異常可能造成其腦神經(jīng)元上nAChR的結構或功能變化，進而導致ADNFLE起病。因此，本研究擬采用PCR產物直接測序法對6個

4、家系及46例散發(fā)患者的CHRNA4基因的全部外顯子進行突變篩查，尋找中國人群ADNFLE的致病基因，探索ADNFLE患者CHRNA4基因編碼區(qū)單核苷酸多態(tài)性(coding single nucleotide polymorphism，cSNP)的特征，闡明中國人群．ADNFLE發(fā)病的分子機制。 [對象和方法] 1.對象：臨床診斷為ADNFLE甩的家系6個，夜間發(fā)作額葉癲癇散發(fā)病例46例。 2.CHRNA4突變的

5、篩查： (1)每例樣本取200μl外周靜脈血液，提取基因組DNA。 (2)全部標本運用PCR方法特異性擴增CHRNA4的1～6號外顯子片段。 (3)對PCR產物進行純化，采用ABl3730測序儀進行測序。測序結果用利用相應進行比對分析。 3.統(tǒng)計：用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，P值小于0.05為差異有顯著性。 [結果] 1.本組ADNFLE家系及散發(fā)患者CHRNA4基因1～6號外顯

6、子片段均未發(fā)現(xiàn)基因突變(包括已報道的熱點突變)的存在，。 2.在第五號外顯子中發(fā)現(xiàn)四個堿基替換，909T→G、1440G→T、1458T→C及942C→T，均為同義替換。前三種突變在70例ADNFLE患者(包括家系和散發(fā)患者)和40例健康對照者均存在，942C→T僅在單個ADNFLE家系患者中發(fā)現(xiàn)。 [結論] 1.本實驗成功地體外擴增了CHRNA4基因的1～6外顯子，對擴增產物進行直接測序，未發(fā)現(xiàn)基因突變的存在，

7、包括已報道的熱點突變(S252F、S256L263insL、T265I)或其他位置均未見突變。提示CHRNA4很可能不是中國南粵地區(qū)ADNFLE患者的主要致病基因。進一步證實了ADNFLE具有明顯的遺傳異質性。 2.在CHRNA4的第五號外顯子上發(fā)現(xiàn)4種同義堿基替換(909T→C、1440G→T、1458T→C和942C→T)，前三種在本研究全部ADNFLE患者(包括家系和散發(fā))及健康對照者中均存在，為基因編碼區(qū)單核苷酸多態(tài)性。