A型尼曼-匹克病的分子遺傳學研究.pdf

1、研究背景:
　　 遺傳代謝病是一類嚴重危害人類身心健康的難治疾患,不僅為家庭及社會帶來沉重負擔,而且危及子孫后代,直接影響人口素質的提高。由于多數(shù)遺傳病的治療仍頗為艱難或費用昂貴,難以普遍實施。因此為減少遺傳病的發(fā)生,廣泛開展預防工作就顯得格外重要。
　　 目的:
　　 研究兩個中國人A型尼曼-匹克病(Niemann-Pick Disease,NPD)家系發(fā)病的分子基礎及基因檢測在中國人NPD家系基因診斷中的意義

2、,并探討其基因型與臨床表型的關系。
　　 方法:
　　 收集兩位先證者及其家庭成員的臨床資料,采用基因組小劑量抽提試劑盒從2個家系共6名成員的外周血中提取基因組DNA,根據(jù)人類基因組數(shù)據(jù)庫中獲得的SMPD1(SPHINGOMYELIN PHOSPHODIESTERASE1)基因序列(NM000543)設計4對引物,采用聚合酶鏈反應(PCR,Polymerase ChainReaction)進行擴增,并采用PCR產(chǎn)物回收試

3、劑盒進行產(chǎn)物回收后DNA直接測序法進行基因突變檢測,測序結果應用DNAman軟件進行序列對比分析,確定基因突變位點,對測序異常的片段重新進行PCR擴增與測序,以驗證結果的可靠性。
　　 結果:
　　 1.PCR.擴增所得片段與預計擴增片段大小一致,沒有非特異擴增帶,可以進行純化與測序。
　　 2.家系1中先證者外顯子1正反向測序在107堿基處顯示C單峰,顯示cDNA107T→C的純合突變。其父親、母親及姐姐外顯子

4、1正反向測序在107堿基處顯示T／C雜合雙峰,顯示cDNA107T→C的雜合突變。107T→C的突變將導致SMPD1編碼的轉錄因子第36位氨基酸的密碼子GTG被GCG取代,從而使其編碼的纈氨酸變成丙氨酸(V36A),屬于錯義突變。
　　 3.家系2中先證者外顯子1正反向測序在107堿基處顯示C單峰,顯示cDNA107T→C的純合突變。其母外顯子1正反向測序在107堿基處顯示T／C雜合雙峰,顯示cDNA107T→C的雜合突變。10

5、7T→C的突變將導致SMPD1編碼的轉錄因子第36位氨基酸的密碼子GTG被GCG取代,從而使其編碼的纈氨酸變成丙氨酸(V36A),屬于錯義突變。
　　 結論:
　　 1.證實SMPD1基因是本研究中兩個無關的A型尼曼匹克病家系的致病基因,與國外報道一致。
　　 2.兩個家系患兒均為SMPD1基因純合突變致病,家庭其他成員為表型正常的基因突變攜帶者。
　　 3.證實cDNA107T→C突變是引起本研究中兩個