血漿游離DNA檢測FLT3-ITD突變及ITD特征對急性髓細胞白血病個體化診斷的意義.pdf

1、目的:探討血漿游離DNA FLT3基因中內部串聯重復序列(internal tandemduplication，ITD)突變及ITD特征，為急性髓細胞白血病（acute myelocytic leukemia，AML）無創(chuàng)性診斷、個體化的分子靶向治療和療效監(jiān)視提供新的策略。
　　方法:1.提取88例初診AML患者和40例對照者（20例健康體檢者及20例良性血液病患者）血漿游離DNA及骨髓細胞DNA，以PCR擴增出管家基因globi

2、n作為DNA提取成功的判定標準，核酸濃度測量儀測量88例初診AML患者和40例對照者血漿游離DNA濃度，并進行比較;2.采用PCR方法同步平行檢測88例初診AML患者血漿游離DNA和骨髓細胞DNA中FLT3-ITD基因突變，產物經瓊脂糖凝膠電泳后，在凝膠成像分析儀上觀察結果，并將檢測結果進行比較。3.毛細管電泳法同步平行檢測FLT3-ITD陽性患者血漿游離DNA和骨髓細胞DNA中的ITD數量，并將檢測結果進行比較。
　　結果:1.

3、88例初診AML患者血漿游離DNA濃度明顯高于20例健康體檢者及20例良性血液病患者，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);健康體檢者與良性血液病患者間、FAB分型不同的初診AML患者間的血漿游離DNA濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。2.88例初診AML患者中發(fā)生FLT3-ITD突變18例(20.5％，18/88)，該結果與骨髓細胞DNA檢測結果完全一致。3.18例FLT3-ITD陽性患者血漿游離DNA的PCR產物經毛細管電泳后結果顯

4、示，13例(72.22％，13/18)患者出現一條ITD條帶峰，其骨髓細胞DNA結果與血漿游離DNA結果一致;5例(27.78％，5/18)患者血漿出現多條ITD條帶峰，而骨髓細胞只有2例結果與其血漿結果一致，另外3例結果不具有一致性。
　　結論:1、初診AML患者血漿游離DNA濃度明顯高于健康人及良性血液病患者;2、初診AML患者血漿游離DNA中檢測白血病特異性的FLT3-ITD基因突變與直接檢測骨髓細胞DNA結果一致，提示在未

5、來可以通過檢測白血病患者血漿游離DNA中特異性的基因突變來診斷白血病，對白血病的無創(chuàng)性診斷、個體化治療和監(jiān)測預后有重要意義;3、18例FLT3-ITD陽性的患者毛細管電泳檢測血漿游離DNA中ITD數量，其中15例血漿游離DNA檢測結果與骨髓細胞DNA檢測結果一致，3例血漿游離DNA檢測結果出現多條ITD條帶峰而骨髓細胞DNA檢測結果并未出現，我們可以推測通過檢測FLT3-ITD陽性AML患者來源于白血病細胞的血漿游離DNA中ITD的數量