IFITM3在胃癌中的表達(dá)及其機(jī)制的研究.pdf

1、背景：胃癌(Gastric cancer，GC)是全世界發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界每年有超過(guò)750，000例新確診病例并且五年生存率不足25％，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療是提高胃癌生存率的重要措施。因此尋找新的胃癌治療靶點(diǎn)和早期診斷標(biāo)志物是控制其發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵。干擾素誘導(dǎo)的跨膜蛋白3(IFITM3)，也稱為1-8U，是干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白家族的成員之一。它是由兩個(gè)短的具有高度相似但不同N-和C-末端的核心序列的跨膜

2、結(jié)構(gòu)域蛋白(5-18 kDa)所組成。IFITM3在不同的細(xì)胞過(guò)程中起到了重要的作用，包括細(xì)胞粘附，免疫細(xì)胞調(diào)節(jié)，生殖細(xì)胞歸巢和成熟和骨礦化。
　　目的：旨在明確IFITM3在48例胃癌組織標(biāo)本及細(xì)胞中的的表達(dá)水平，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)探究其對(duì)胃癌細(xì)胞株遷移，侵襲，增殖和細(xì)胞周期的影響及相關(guān)的分子學(xué)機(jī)制，從而更好的探索和揭示IFITM3預(yù)防和治療胃癌的分子機(jī)理。
　　方法：⑴通過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)方法檢測(cè)收集的

3、48例胃癌手術(shù)標(biāo)本（癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織）中的IFITM3的mRNA的表達(dá)量，并進(jìn)一步分析其與臨床病例資料的關(guān)系;利用qRT-PCR和蛋白免疫印跡法(western blot)分別檢測(cè)出胃癌細(xì)胞AGS、SGC-7901、BGC-823、MKN45、MKN28和正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1中IFITM3的表達(dá);使用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)不同病理分期的胃癌組織中IFITM3的蛋白表達(dá)。⑵利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，建立IFITM3沉默的胃癌穩(wěn)定轉(zhuǎn)

4、染細(xì)胞株，運(yùn)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell跨膜實(shí)驗(yàn)、CCK8、流式細(xì)胞技術(shù)來(lái)觀察細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖的能力。⑶倒置顯微鏡下觀察IFITM3干擾前后穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)變化;使用熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot技術(shù)分別在RNA和蛋白水平上檢測(cè)沉默組、對(duì)照組以及正常細(xì)胞株中EMT(Epithelial-Mesenchymal Transitions，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化)相關(guān)蛋白（E-Cadherin和Vimentin）的表達(dá)。⑷使

5、用熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot檢測(cè)MMP-2和MMP-9在IFITM3沉默胃癌細(xì)胞株和正常細(xì)胞中的不同表達(dá)。⑸用Wnt/β-catenin通路特異性抑制劑XAV939作用于不同濃度的胃癌細(xì)胞株，qRT-PCR和Western blot檢測(cè)β-catenin和IFITM3表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：①發(fā)現(xiàn)IFITM3在胃癌組織中的表達(dá)量明顯高于癌旁組織，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，通過(guò)臨床病理資料分析結(jié)果顯示:IFITM3的

6、表達(dá)量與TNM分期、區(qū)域淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān);與胃正常粘膜上皮細(xì)胞GES-1相比，胃癌細(xì)胞株SGC-7901、BGC-823、AGS中IFITM3表達(dá)量顯著增高，其中，在SGC-7901細(xì)胞株的表達(dá)量最高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而MKN28、MKN45中的表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②成功構(gòu)建IFITM3的穩(wěn)轉(zhuǎn)干擾胃癌細(xì)胞株SGC-7901和BGC-823，CCK8實(shí)驗(yàn)證明干擾IFITM3能夠抑制細(xì)胞的增值能力。流式周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明IFITM3

7、干擾株能夠使胃癌細(xì)胞的細(xì)胞周期停滯于G0/G1期并減少S期的細(xì)胞數(shù)。③細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，Transwell跨膜實(shí)驗(yàn)表明IFITM3可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力。④倒置電子顯微鏡觀察干擾IFITM3表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞株，細(xì)胞形態(tài)由正常的梭形轉(zhuǎn)變成卵圓形，且偽足變少，有逆轉(zhuǎn)EMT的趨勢(shì);熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot結(jié)果示:在RNA和蛋白水平上，IFITM3的穩(wěn)轉(zhuǎn)干擾胃癌細(xì)胞株的E-Cadherin表達(dá)量增加，Vimentin

8、表達(dá)量減少。⑤使用熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot檢測(cè)到MMP-2和MMP-9在IFITM3沉默細(xì)胞株中顯著低表達(dá)。⑥使用Wnt/β-catenin通路特異性抑制劑XAV939之后，通過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot檢測(cè)相對(duì)于未處理組，IFITM3表達(dá)量隨β-catenin均顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：在胃癌組織中，IFITM3的高表達(dá)與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，IFITM3可作