基因沉默NMⅡ修復大鼠脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、分類號：R6815密級：學位類別：科學學位團專業(yè)學位口學校代碼：10062學號：2011602239學科門類：醫(yī)學又坪眚斜鼻號碩士學位論文M【ASTER’SDISSERI’ATIoN論文題目：基因沉默瑚II修復大鼠脊髓損傷的實驗研究TITLE：ExperimentalStudyofSilencingNMIIGeneforTreatingSpinalCordInjuryinRats一級學科：臨床醫(yī)學二級學科：外科學骨外論文作者：李玉琳指導

2、教師：馮世慶導師組成員：寧廣智天津醫(yī)科大學研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要研究目的；脊髓損傷(SpinalCordInjury，SCI)是脊柱外科最嚴重的創(chuàng)傷性疾病，具有高發(fā)病率、高致殘性的特點，SCI后促進神經(jīng)的再生與修復始終是此領域的研究重點。生長錐塌陷抑制軸突的延伸是SCI難以恢復的關鍵問題，如何促進脊髓損傷后軸突再生、改善抑制軸突再生的微環(huán)境己成為脊髓損傷修復的研究熱點。有文獻報道肌動蛋白絲和微管構成的細胞

3、骨架在神經(jīng)生長和生長錐導向過程中起著重要作用。NMlI位于RhoA／Rock信號通路的下游，激活態(tài)的NMII通過調(diào)控細胞骨架結構促進了生長錐的塌陷，抑制軸突的延伸。同時有研究發(fā)現(xiàn)基因沉默或化學藥物抑制NMII可以明顯提高哺乳動物細胞的生存能力。因此本課題擬通過制備大鼠脊髓損傷模型研究基因沉默NMII通過工程化調(diào)節(jié)生長錐結構對損傷局部軸突再生的影響及對神經(jīng)細胞存活能力的影響，并通過功能評分評估對大鼠功能恢復的影響。研究方法：將雌性Wist

4、ar大鼠40只隨機分為4組，即siRNA注射1組(A組)、siRNA注射2組(B組)、空載體對照組(C組)和空白對照組(D組)，每組lO只。利用ImpactorModel—II脊髓打擊器制備大鼠脊髓胸10(TIO)損傷模型(109X25ram)。損傷后大鼠進行正常護理和飲食。構建慢病毒載體用以體內(nèi)沉默NMII。傷后8w處死動物，采用westernblot技術檢測各分組NMII表達水平，與體外實驗形成互相參照，評價體內(nèi)NMII基因沉默效率

5、。采用免疫組化方法觀察神經(jīng)元及膠質(zhì)細胞存活情況(NF200、GFAP)。采用westernblot技術觀察軸突再生情況及突觸連接形成情況(NeuN、SYN)，結合BBB評分評價NMII基因沉默對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能修復的影響。研宄結果：成功構建慢病毒載體，siRNA注射1組在大鼠體內(nèi)沉默NMIIA的效率高達95％以上；siRNA注射2組沉默效率約為60％。傷后8w處死動物，免疫組化染色結果顯示：siRNA注射1組神經(jīng)元(NF200)、