甘藍(lán)夜蛾中兩種不同類型幾丁質(zhì)脫乙酰基酶基因的克隆與表達(dá)研究.pdf

1、昆蟲蛻皮是一個(gè)復(fù)雜的生理過程,在這個(gè)過程中有多種酶、激素和受體分子參與其中。本研究對(duì)在其中分解幾丁質(zhì)起到重要作用的幾丁質(zhì)脫乙酰基酶基因進(jìn)行了初步研究。通過破壞昆蟲幾丁質(zhì)脫乙?；负铣苫蚪到馔緩綄?duì)昆蟲非常有害,在實(shí)際應(yīng)用中使其成為害蟲生物防治的又一靶標(biāo)。
　　 幾丁質(zhì)(chitin)又稱甲殼素、甲殼質(zhì)等,是由N-乙酰-D-葡萄糖胺通過β-1,4糖苷鍵連接而成的直鏈高分子化合物。在自然界中,幾丁質(zhì)存在于真菌及藻類的細(xì)胞壁、無脊椎動(dòng)

2、物的外骨骼及表皮中,是自然界中僅次于纖維素的第二大可再生自然資源。研究證明,幾丁質(zhì)是昆蟲表皮和圍食膜的重要組成成分,昆蟲生長(zhǎng)、發(fā)育的各個(gè)時(shí)期都需要一定量的幾丁質(zhì)。
　　 幾丁質(zhì)脫乙?；?chitin deacetylase,簡(jiǎn)稱CDA,EC.3.5.1.41)。CDA來源廣泛,如真菌、酵母和昆蟲中都發(fā)現(xiàn)CDA的存在,是幾丁質(zhì)降解酶系成員之一,能夠催化幾丁質(zhì)中β-1,4糖苷鍵連接的N-乙?；咸前返囊阴０坊乃?可以將幾丁質(zhì)轉(zhuǎn)

3、化為殼聚糖,在是昆蟲幾丁質(zhì)代謝中一種關(guān)鍵酶,在昆蟲的多種生理活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。
　　 本研究以甘藍(lán)夜蛾Mamestrabrassicae5齡幼蟲蟲體為材料提取總RNA,利用RT-PCR和RACE技術(shù),分別擴(kuò)增得到甘藍(lán)夜蛾的2種不同幾丁質(zhì)脫乙?；富虻腸DNA序列。其中一種CDA含有2036個(gè)堿基,包括一個(gè)1617個(gè)堿基的開放讀碼框,編碼一個(gè)含539個(gè)氨基酸的蛋白,分子量約為61.5KDa,我們定義其為cDNA1;另一種CDA

4、含有1312個(gè)堿基,包括一個(gè)1173個(gè)堿基的開放閱讀框,編碼一個(gè)含390個(gè)氨基酸的蛋白,分子量約為44.1Kda,我們定義其為cDNA2。cDNA1推導(dǎo)的氨基酸序列具有幾丁質(zhì)脫乙?；傅湫偷娜齻€(gè)功能區(qū),分別是幾丁質(zhì)結(jié)合區(qū),催化區(qū)和低密度脂蛋白受體區(qū),屬于CDA第1組(groupⅠ)的成員。cDNA2推導(dǎo)的氨基酸序列只有幾丁質(zhì)催化區(qū),屬于CDA第5組(groupⅤ)的成員。利用RT-PCR進(jìn)行該基因在mRNA水平上的表達(dá)表明幾丁質(zhì)脫乙酰基