硒和VitC對(duì)高氟所致氧化應(yīng)激、DNA損傷及Bcl-2蛋白表達(dá)影響研究.pdf

1、目的：
　　 地方性氟中毒是世界上廣泛分布的一種地方病，我國是該病流行最嚴(yán)重的國家之一。硒和維生素C 聯(lián)用對(duì)氟致毒性影響的研究至今還未見報(bào)道。本研究從硒和維生素C 單獨(dú)作用的基礎(chǔ)上進(jìn)行研究，通過探討不同劑量硒和維生素C對(duì)高氟所致氧化應(yīng)激、DNA 損傷及Bcl-2蛋白表達(dá)影響，為下一步硒和維生素C 聯(lián)用對(duì)氟致毒性的研究提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 將健康大鼠隨機(jī)分成空白對(duì)照組、高氟組、低硒組、中硒組、高硒組、低維

2、生素C組、中維生素C組及高維生素C組。除空白對(duì)照組飲用自來水并灌胃蒸餾水外，其他組大鼠均飲用150mg/ml 氟化鈉（NaF）溶液并灌胃相應(yīng)劑量的亞硒酸鈉溶液（低硒組：4ug/ml 亞硒酸鈉溶液；中硒組：8ug/ml 亞硒酸鈉溶液；高硒組：16ug/ml 亞硒酸鈉溶液。）或維生素C溶液（低維生素C組：0.01g/ml 維生素C溶液；中維生素C組：0.02g/ml 維生素C溶液；高維生素C組：0.04g/ml 維生素C溶液）。給藥體積均為

3、5ml/kg 體重，每天1次，給藥時(shí)間共一個(gè)月。給藥一個(gè)月后處死大鼠，采集標(biāo)本進(jìn)行如下處理：
　　 1.采用離子電極選擇法測(cè)定大鼠尿中氟離子濃度；測(cè)定肝、腎臟器系數(shù)；
　　 2.測(cè)定大鼠肝臟和腎臟氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)：采用硫代巴比妥酸(TBA)顯色法測(cè)定丙二醛（MDA）含量；采用二硫雙硝基苯甲酸(DTNB)法測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性；采用鄰苯三酚自氧化法測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）活性。
　　 3.

4、采用單細(xì)胞凝膠電泳方法測(cè)定大鼠肝臟和腎臟細(xì)胞DNA 損傷率。
　　 4.采用免疫組化方法觀察肝、腎組織的Bcl-2蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.尿氟和臟器系數(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：飲用氟化鈉溶液后各組尿氟濃度均升高，其中空白對(duì)照組和高氟組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示飲用氟化鈉溶液促進(jìn)了尿氟的排泄。中硒組、低維生素C組和中維生素C組與空白對(duì)照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而與高氟組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義（P>0.05），提示中劑量的硒和低中劑量的維生素C 均不能改善因飲用氟化鈉導(dǎo)致的尿氟濃度的升高，低硒組和高氟組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而與空白對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各組間臟器系數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 2.肝腎組織氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組和高氟組相比，各硒組和各維生素C組肝GSH-Px 均有所升高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。肝MDA 各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

6、P>0.05）。與空白對(duì)照組組和高氟組相比，低硒組肝SOD顯著升高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與空白對(duì)照組相比，高氟組腎GSH-Px 顯著升高并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。低維生素C組和高氟組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 低硒組和中硒組與空白對(duì)照組間腎MDA差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），高硒組和低維生素C組與高氟組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3.DNA 損傷測(cè)定結(jié)果顯示：肝組織高氟

7、組與空白對(duì)照組相比細(xì)胞損傷率升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。低硒組、高硒組與高氟組的損傷率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。中硒組與空白對(duì)照組的損傷率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與高氟組無顯著差異（P<0.05）。高維生素C組、中維生素C組與高氟組的DNA 損傷率無顯著性差異（P>0.05）。腎組織空白對(duì)照組與高氟組損傷率無顯著性差異（P>0.05）。硒各劑量組的損傷率與高氟組的損傷率無顯著差異（P>0.05）。維生素C 各劑量組和高氟組

8、細(xì)胞損傷率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 4.Bcl-2蛋白表達(dá)測(cè)定結(jié)果顯示：各組間肝腎組織Bcl-2蛋白表達(dá)不明顯，平均光密度值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。高氟組和空白對(duì)照組相比平均光密度值有所下降但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)于肝組織，隨著硒和維生素C的劑量的增加，平均光密度值逐漸增加，但差異尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.大鼠攝入高劑量氟后，尿氟濃度顯著升高，說明染氟實(shí)驗(yàn)成功。

9、低劑量的硒可以改善因飲用氟化鈉導(dǎo)致的尿氟濃度的升高，對(duì)氟導(dǎo)致的腎損害具有保護(hù)作用。
　　 2.大鼠攝入高劑量氟后，肝組織脂質(zhì)過氧化作用不明顯，表明肝臟對(duì)氟所致過氧化作用有一定的代償能力。
　　 3.大鼠攝入高劑量氟后，肝細(xì)胞發(fā)生了顯著DNA 損傷。低劑量和高劑量的硒對(duì)氟致肝臟細(xì)胞的DNA 損傷起到了拮抗作用。各劑量組維生素C與氟化鈉聯(lián)用時(shí)產(chǎn)生了腎細(xì)胞毒性，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的產(chǎn)生機(jī)制有待進(jìn)一步研究。推測(cè)可能與實(shí)驗(yàn)劑量和試驗(yàn)時(shí)間等