骨鈣素化學發(fā)光免疫分析法的建立及初步臨床應用.pdf

1、目的：本研究旨在建立穩(wěn)定、敏感、特異的檢測骨鈣素的化學發(fā)光免疫分析法，為臨床準確診斷疾病及預測疾病的預后、并進而采取相應的措施阻止或延緩疾病的發(fā)展進程提供客觀的臨床診斷依據；并對幾種骨代謝疾病進行血清骨鈣素水平的初步觀察，探討化學發(fā)光免疫分析法檢測骨鈣素濃度變化在骨代謝疾病中的臨床意義。
　　 方法：本研究在方法學建立階段主要從工藝配方和反應體系的優(yōu)化與確定、方法學性能指標的分析、以及穩(wěn)定性觀察等方面進行了著手研究；而后在臨床的

2、初步應用中則注重對幾種骨代謝疾病進行血清骨鈣素水平的初步觀察，探討化學發(fā)光免疫分析法檢測骨鈣素濃度變化在骨代謝疾病中的臨床意義。
　　 結果：
　　 1工藝配方研究
　　 本研究利用雙抗體夾心法檢測骨鈣素原理，通過對固相包被工藝配方、封閉工藝配方進行探索和優(yōu)化試驗研究，最后選用0.05M pH9.5-9.7的碳酸鹽緩沖液作為固相包被用緩沖液，2-8℃孵育20-22小時；洗板一次，去除結合不牢固的游離組份；再加惰性

3、蛋白緩沖液于2-8℃孵育18-20小時以封閉非特異性空余位點，之后去除封閉液；在相對濕度30％以下的環(huán)境中干燥3-7個小時，用鋁箔袋密封包裝，于2～8℃條件保存。
　　 2反應體系的研究
　　 本研究還參照同類產品的反應模式對新建立骨鈣素化學發(fā)光免疫分析法的反應體系進行優(yōu)化試驗研究，最后確定反應模式為：加入50μl校準品、質控品及待測樣品到反應孔中，再加100μl測骨鈣素酶結合物，混勻后置室溫反應60分鐘；用洗液沈板4次

4、后，再用蒸餾水洗板一次，拍干；每孔加100μl等量混合的化學發(fā)光底物A液、B液(各50μl)，在5-20分鐘內用化學發(fā)光免疫分析儀檢測發(fā)光值(0.1秒/每孔)，判讀結果。
　　 3分析性能研究
　　 在工藝配方和反應體系研究完成之后，本研究又針對骨鈣素化學發(fā)光免疫分析法的分析性能進行評估研究，包括靈敏度分析、特異性分析、劑量反應曲線的線性、測定準確性、精密度等指標。通過對不同時間研制的不同批次的骨鈣素化學發(fā)光免疫分析法成

5、品的性能評估結果進行統計分析進而制定成品標準的指標設置，以有效地控制該方法的持續(xù)穩(wěn)定。最終設定分析靈敏度即最低檢出限不高于0.20ng/ml；特異性分析：與降鈣素、甲狀旁腺激素、胰島素的交叉反應率應均小于0.01％；劑量-反應曲線的線性相關系數r應不低于0.9900；測定準確性：質控品的實測值與標示值的比值應在0.90-1.10之間；批內不精密度也即分析內不精密度以變異系數(CV％)表示應不高于10.0％，批間不精密度也即分析間不精密度

6、以變異系數(CV％)表示應不高于15.0％。
　　 4初步臨床應用
　　 本研究還利用該方法制備的骨鈣素化學發(fā)光法試劑盒在我院進行初步的臨床應用，觀察不同病種，不同年齡組中血清骨鈣素水平的差異。
　　 結論：
　　 綜合整個研制過程及初步臨床應用結果，本研究研制的骨鈣素化學發(fā)光免疫分析法試劑盒用于骨鈣素的檢測，其靈敏度、準確性、線性、精密度、特異性、穩(wěn)定性、臨床靈敏度和臨床特異性等指標均能滿足臨床需求，成