白細胞介素21受體(IL-21R)信號在TNBS誘導小鼠炎癥性腸病病變形成中的作用研究.pdf

1、目的:炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)是一種特殊的慢性炎癥性腸道疾病，包括克羅恩氏病(Crohn's disease，CD)和潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)，其病因和發(fā)病機制與遺傳基因、環(huán)境、生活習慣和免疫系統(tǒng)功能紊亂等多種因素密切相關。但目前，普遍認為腸黏膜異常的免疫應答是引起黏膜組織損傷及慢性炎癥的重要原因。IL-21作為γ鏈細胞因子家族成員之一，與其受體結合后發(fā)

2、揮多種生物學調節(jié)功能，參與包括IBD在內的多種自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展。據(jù)調查，臨床IBD患者血清中IL-21水平明顯增加，提示IL-21/IL-21R信號可能在IBD的病變形成中發(fā)揮重要作用，但在以DSS或TNBS等化學試劑誘導的小鼠IBD模型中，IL-21/IL-21R信號對IBD發(fā)生發(fā)展的具體作用機制尚不十分明確。因此，本課題利用IL-21R基因敲除小鼠建立TNBS誘導的炎癥性腸病動物模型，探討IL-21/IL-21R信號在炎癥性

3、腸病病變形成中對腸固有層輔助T細胞應答的調控機制，及對炎癥性腸病發(fā)生、發(fā)展的影響。
　　研究方法:利用C57BL/6J(wild type，WT)和相同基因背景的IL-21R基因敲除小鼠（IL-21RKO），建立TNBS誘導的炎癥性腸病動物模型（因TNBS誘導的腸炎模型癥狀與人類IBD，尤其是CD的臨床癥狀和病理表現(xiàn)相似，且模型建立方法成熟）:兩組小鼠均禁食12h后，用4％TNBS灌腸，每組15只。
　　(1)參照Coope

4、r HS的方法，每天稱量各組小鼠體重，觀察其糞便性狀、下痢、大便隱血狀況及生存率。
　　(2)小鼠誘導第五天，取近心端1/2處結腸組織0.5 cm，浸泡于4％多聚甲醛溶液中固定，隨后經過脫水、石蠟包埋、切片后進行HE染色，光學顯微鏡下觀察小鼠腸組織形態(tài)結構及炎癥反應情況，根據(jù)Sun等的炎癥分級標準評估病理組織學得分。
　　(3)小鼠誘導第五天，分離和提取腸固有層淋巴細胞(lamina propria lymphocyte，L

5、PL)，細胞計數(shù)后，體外PMA/ionomycin/BFA刺激下再培養(yǎng)4h，應用流式細胞儀檢測Th1、Th2、Th17和Treg細胞比例和絕對數(shù)。
　　(4)將2×105 LPL置于96孔板中，在有、無TCR刺激條件下（刺激組:加入抗CD3抗體10μg/ml和抗CD28抗體1μg/ml;非刺激組:不加抗體）體外培養(yǎng)48小時后取各孔細胞培養(yǎng)上清，應用ELISA試劑盒，根據(jù)說明書檢測培養(yǎng)上清中的細胞因子的分泌（IFN-γ、 IL-4、

6、IL-17A、IL-10）。
　　結果:1、TNBS誘導的小鼠實驗性腸炎模型成功建立。2、與WT小鼠相比，IL-21RKO小鼠肉眼可見腸管明顯縮短、水腫、充血，腸管易脆;組織病理學檢測上皮損傷嚴重、隱窩大面積消失、大量炎性細胞浸潤，并侵犯到黏膜肌層，黏膜下層組織水腫增厚，組織學評分明顯增加;與WT小鼠相比，IL-21RKO小鼠體重下降更快，生存率明顯降低，對TNBS誘導的腸炎易感性顯著增強。3、與WT小鼠相比，IL-21RKO小鼠