BoNT-A關節(jié)腔注射對佐劑性關節(jié)炎疼痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)中TRPV1表達的影響.pdf

1、目的：觀察A型肉毒毒素（botulinum toxin type A BoNT/A)關節(jié)腔注射對佐劑性關節(jié)炎疼痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion DRG)中瞬態(tài)電壓感受器陽離子通道1（transient receptor potential vanilloid type1 TRPV1)表達的影響并且討論其參與的鎮(zhèn)痛機制。
　　方法：SD雄性大鼠162只,按隨機數(shù)字表法取18只大鼠左后肢踝關節(jié)腔注射50μL生

2、理鹽水作為Sham組,其余大鼠左后肢踝關節(jié)腔注射50μL完全弗氏佐劑（complete freund’s adjuvant CFA)建立佐劑性關節(jié)炎疼痛模型后按隨機數(shù)字表法分為CFA組（36只），和BoNT/A組：1U（36只）、3U（36只）、10U（36只）。建模3周關節(jié)炎疼痛模型逐漸穩(wěn)定后，Sham組和CFA組大鼠關節(jié)腔內注射20μL生理鹽水，而1U,3U,10U組大鼠關節(jié)腔內注射不同劑量20μL的BoNT/A即:Sham組為對照

3、組+關節(jié)腔內注射20μL生理鹽水，CFA組為模型組+關節(jié)腔內注射20μL生理鹽水，1U BoNT/A組為模型組+關節(jié)腔內注射1U的20μLBoNT/A,3U BoNT/A組為模型組+關節(jié)腔內注射3U的20μLBoNT/A,10U BoNT/A組為模型組+關節(jié)腔內注射10U的20μLBoNT/A。分別于造模前1、5天，造模后3、7、14、21天和給藥后1、3、5、7、14天對各組大鼠進行機械痛撤足閾值和熱痛閾潛伏期測試，紅外熱成像觀察，應

4、用免疫印跡和免疫熒光法觀察不同時間點各組大鼠DRG中TRPV1蛋白表達水平和TRPV1/CGRP陽性細胞數(shù)百分比變化。給藥后觀察BoNT/A的水解產(chǎn)物裂解的突觸相關蛋白-25kDa（cleaved synaptosomal-associated protein of25 kDa cl-SNAP-25)是否可以通過軸漿逆向運輸?shù)竭_DRG，進一步觀察其到達DRG后對TRPV1蛋白水平和TRPV1/CGRP陽性細胞數(shù)百分比及TRPV1 mRN

5、A水平表達變化的影響，以及HE染色觀察關節(jié)炎相關組織的病變情況。
　　結果：
　　1,與Sham組相比,造模后CFA組機械痛撤足閾值和熱痛閾潛伏期明顯降低(P＜0.001)，TRPV1受體的蛋白表達水平(P＜0.001)，TRPV1/CGRP陽性細胞數(shù)百分比顯著上調(P＜0.001)和TRPV1 mRNA水平明顯升高(P＜0.01)。
　　2,與CFA組相比, BoNT/A組機械痛撤足閾值升高且存在劑量依賴性，3 U組

6、、10 U組給藥后3天內大鼠的機械痛撤足閾值開始提高(P＜0.01),第5天開始鎮(zhèn)痛效果比較顯著(P＜0.001)一直持續(xù)到第14天差異仍有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），而3 U組和10U組比較組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。與CFA組相比，1U組給藥后第14天時才發(fā)現(xiàn)有顯著鎮(zhèn)痛效果（P＜0.01）。與CFA組相比，關節(jié)腔注射BoNT/A后，3 U組、10 U組大鼠熱痛閾潛伏期顯著提高，給藥后熱痛閾潛伏期3天內開始提高（3U P＜

7、0.05;10U:P＜0.01），5天后達到高峰（P＜0.001）一直持續(xù)到第14天（P＜0.001）,而3 U組和10U組比較，組間熱痛閾潛伏期差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。但是，給藥后1U組與CFA組熱痛閾潛伏期比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3,與Sham組相比，CFA注射后大鼠踝關節(jié)體表溫度顯著升高，從CFA注射第3天開始持續(xù)到檢測的第35天差異仍非常顯著（P＜0.001）。與CFA組相比，BoNT/A注

8、射后（1 U、3 U、10U）組踝關節(jié)體表溫度顯著降低，第5天開始踝關節(jié)體表溫度顯著降低(P＜0.05)一直可持續(xù)到第14天差異仍非常顯著（P＜0.05），但是BoNT/A（1 U、3 U、10U）各劑量組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4, CFA組生理鹽水注射5天、14天踝關節(jié)滑膜增生和軟骨破壞的情況沒有明顯改善；與CFA組相比，BoNT/A注射后（1 U、3 U、10U）組注射5天、14天后踝關節(jié)滑膜增生和軟骨破壞

9、的情況明顯改善。但是，BoNT/A（1 U、3 U、10U）各劑量組間無明顯差異。
　　5,使用免疫熒光方法在BoNT/A組的DRG中檢測到了cl-SNAP-25并且發(fā)現(xiàn)TRPV1和cl-SNAP-25雙標免疫熒光染色陽性細胞，從而證明關節(jié)腔注射BoNT/A后其可以通過軸漿逆向運輸?shù)姆绞降竭_DRG中TRPV1陽性細胞中。
　　6,關節(jié)腔注射BoNT/A5天后,與CFA組相比, BoNT/A組TRPV1受體的蛋白表達水平和TR

10、PV1/CGRP陽性細胞數(shù)百分比顯著降低且存在劑量依賴性，但BoNT/A各組TRPV1 mRNA與CFA組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論：以上結果說明關節(jié)腔注射BoNT/A后不僅可以改善關節(jié)軟骨破壞和滑膜增生反應，而且可以通過軸漿逆向運輸方式到達DRG,并通過抑制DRG中TRPV1的蛋白表達水平顯著降低機械觸發(fā)痛和熱痛覺過敏，但是并沒有下調TRPV1 mRNA水平。這些研究說明BoNT/A可能通過抑制TRPV1的