改良型人NK細胞體外擴增技術(shù)建立及CAR-NK細胞治療技術(shù)初步研究.pdf

1、NK細胞過繼療法是腫瘤免疫療法的一種具有前景的治療策略，然而，大量擴增具有功能的NK細胞方法的缺乏限制了它的發(fā)展。由于IL21分子是NK細胞功能的重要調(diào)節(jié)分子，因此本文的主要目的之一是建立一種改良型的基于IL21分子的NK細胞體外擴增技術(shù)。在本文中，我們在穩(wěn)定表達IL15和CD137L分子的pAPC細胞上再進一步表達 IL21分子，然后用構(gòu)建的該工程細胞株（命名為pAPCNK）來擴增NK細胞。具體方法為：分離4名健康人外周血單個核細胞（

2、Peripheral blood mononuclear cell，PBMC），采用工程細胞pAPCNK并補充細胞因子IL2對NK細胞進行體外擴增，應用細胞計數(shù)法和流式細胞術(shù)分別比較NK細胞的擴增倍數(shù)和NK細胞純度，并采用CFSE/7-AAD法對腫瘤細胞K562和RPMI-8226進行細胞毒性試驗檢測殺傷效率。經(jīng)過三周的刺激培養(yǎng)，NK細胞平均擴增至409.4倍，細胞純度由最初的低于20％提高到90%以上。殺傷實驗結(jié)果顯示，擴增的NK細胞

3、對K562細胞殺傷率高達85.2%。
　　但由于 NK細胞非抗原特異性的殺傷特征，會限制其臨床上的治療效果。近年來過繼性細胞治療技術(shù)中，嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor，CAR）修飾的T細胞技術(shù)異軍突起，在體外和臨床試驗中表現(xiàn)出良好的靶向性、殺傷性和持久性，展示了巨大的應用潛力和發(fā)展前景。因此本研究在NK細胞擴增技術(shù)體系建立的基礎(chǔ)上，嘗試開發(fā)CAR-NK細胞治療技術(shù)，從而提高NK細胞活性并且讓 NK