GSK3β調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞自噬在帕金森病發(fā)病中的作用及機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:篩選穩(wěn)定表達(dá)A30Pα-synuclein的PC12細(xì)胞株為研究對(duì)象,通過(guò)細(xì)胞和分子水平的實(shí)驗(yàn),初步探討表達(dá)不同活性的GSK3β對(duì)自噬通路的調(diào)節(jié)是否會(huì)引起α-synuclein自噬水平的變化及其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
  方法:
  1.將A30Pα-synuclein質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至生長(zhǎng)狀態(tài)良好的PC12細(xì)胞,并通過(guò)G418篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞。
  2.脂質(zhì)體法將GSK-3β過(guò)表達(dá)質(zhì)粒、GSK-3β沉默質(zhì)粒及空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至

2、A30Pα-synuclein的PC12細(xì)胞株,篩選不同穩(wěn)定表達(dá)GSK3β活性的細(xì)胞株,Werstern blot檢測(cè)GSK-3β轉(zhuǎn)染后的表達(dá)情況,驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。
  3.Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中LC-3Ⅱ、Beclin1、α-synuclein的表達(dá)。
  4.MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化。
  5.TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化。
  結(jié)果:
  1.GSK3β過(guò)表達(dá)組與GSK3β沉默組、

3、空白質(zhì)粒組、空白對(duì)照組相比:LC-3Ⅱ及 Beclin1的表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);α-synuclein的表達(dá)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);MTT及TUNEL法結(jié)果表明細(xì)胞的凋亡減少,存活增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
  2.GSK3β沉默組與GSK3β沉默組、空白質(zhì)粒組、空白對(duì)照組相比:LC-3Ⅱ及Beclin1的表達(dá)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);α-synuclein的表達(dá)增

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