CIK細胞體外殺傷人肝癌細胞的實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面進行論述：
　　第一部分：CIK細胞的培養(yǎng)及表型鑒定
　　目的：探討CIK細胞的培養(yǎng)及體外增值方法，觀察CIK細胞體外增值的規(guī)律并對其進行表型分析。
　　方法：從健康志愿者肘靜脈抽取外周血，密度梯度離心，分離出單個核細胞（PBMC），將該細胞種植于CD3單克隆抗體及包被的細胞培養(yǎng)瓶中。然后在培養(yǎng)基里加入重組人IFN-γ、IL-1α和IL-2。第0天、第3天、第6天、第9天、第12天、第15、第18

2、天和第21天時分別用抗人CD3-FITC，抗人CD56-PE標記CIK細胞，然后上流式細胞儀進行測定CD3+、CD56+細胞比例
　　結(jié)果：CIK細胞在最初的三天增殖相對緩慢，至第15天增殖速度達到頂峰，隨著培養(yǎng)時間的延長，CD3CD56雙陽性的比例逐漸升高。
　　結(jié)論：CIK細胞體外培養(yǎng)方法可靠，具有明顯的活性，隨著時間的延長，CIK細胞的倍增明顯。
　　第二部分：CIK細胞體外殺傷人肝癌細胞的實驗研究
　　目

3、的：將培養(yǎng)成功的CIK細胞與人肝癌細胞共培養(yǎng)，分析CIK細胞對人肝癌細胞增殖、凋亡以及克隆形成的影響，更好地為臨床治療HCC提供實驗依據(jù)。
　　方法：將CIK細胞分別與三種人肝癌細胞系（HepG2,Hep3B和Huh7細胞）在同一培養(yǎng)體系內(nèi)共同培養(yǎng)24h及48h。采用流式細胞術(shù)對CIK細胞的表型進行分析，CCK-8法檢測人肝癌細胞的增殖情況。通過軟瓊脂平板細胞克隆形成實驗分析人肝癌細胞的克隆形成能力，使用Annexin V-PI雙

4、染法檢測肝癌細胞的凋亡情況。RT-PCR法和Westen blotting法分別檢測凋亡分子Bax和Caspase-3的mRNA及蛋白水平表達情況。
　　結(jié)果：體外培養(yǎng)的CIK細胞可明顯抑制三種肝癌細胞系的生長，克隆形成能力減弱，導(dǎo)致肝癌細胞系的凋亡（凋亡細胞比例增加，凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表達水平升高），并且對HepG2肝癌細胞系的抑制效果較Hep3B和Huh7兩種肝癌細胞系更加明顯。
　　結(jié)論：在體外，CI