擬南芥轉錄因子CBF1及NAC基因的克隆與原核表達.pdf

1、轉錄因子(transcription factor，TF)是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質，又稱反式作用因子。通過識別與結合真核基因啟動子中的順式作用元件，使目的基因的表達得到精準的調控。擬南芥在植物結構功能、進化遺傳及生態(tài)學領域的研究被廣泛使用，是大家廣為熟悉的植物遺傳學研究中的模式生物。擬南芥模式植物的優(yōu)點是其功能基因較容易獲得。在植物功能基因的研究中，常常需要實現目的基因以特定的強度、在特定的時間和空間表達的效果，

2、而這正是因為轉錄因子在這過程中所起的作用。CBF1和 NAC是兩種重要的激活植物抗逆基因表達的轉錄因子。擬南芥CBF1轉錄因子能調控一組抗干旱和抗低溫基因的表達，從而有效提高植物體對干旱和低溫的抗性能力；擬南芥NAC主要參與調控植物低溫、干旱、激素、高鹽、生長發(fā)育及病原脅迫反應等相關過程。
　　本研究以擬南芥(Arabidopsis thaliana)葉片為研究材料，通過基因克隆和表達的方法初步研究了植物轉錄因子CBF1和NAC的

3、功能，為后續(xù)植物抗逆性能改良打好基礎。實驗首先用Trizol試劑法提取總RNA，經RT-PCR反轉錄，之后擴增CBF1基因和NAC基因；接著對目的基因進行克隆篩選，并通過酶切和測序進行鑒定，最后分析序列并利用軟件 DNAMAN翻譯相應蛋白質，預測了蛋白質的水親和性；最后利用克隆獲得的CBF1基因構建原核表達載體，通過誘導表達獲取蛋白差異表達譜。SDS-PAGE結果表明 CBF1基因表達產物大小為24 kD。本研究獲得的初步結果為植物的抗